抗体发现“卷王”Sphere Bio推出小鼠IgG检测方案

Cyto-Cellect® Mouse试剂盒

快速检测，精准结果

Cyto-Cellect® Mouse试剂盒是专门为与Cyto-Mine®单细胞微流控分析平台配合使用而设计的。该试剂盒可检测包裹在微滴中的小鼠细胞分泌的全分子小鼠IgG（图1）。与Cyto-Mine®结合使用可快速测定单细胞的生产力，从而有助于鉴定和筛选高产细胞。

图1. Cyto-Cellect® Mouse试剂盒用于检测小鼠IgG分泌细胞的示意图。每个微滴内都包含定制的IgG特异性荧光探针，细胞分泌的IgG被探针对识别后形成三元FRET复合物，释放荧光信号。

性能表现及实测数据

本实验证明了Cyto-Cellect® Mouse检测试剂盒可对小鼠IgG抗体（IgG1、IgG2a和IgG2b）提供灵敏的检测，兼容微孔板读板机和Cyto-Mine®，还兼容不同类型的培养基（经过测试的）。特异性好，检测试剂盒与小鼠IgM、人或兔IgG没有交叉反应。在实测中，使用Cyto-Mine®平台，可在缩短至60 min的孵育时间内成功分离小鼠IgG分泌细胞，并在分配后细胞仍可以生长。

性能表现

1 灵敏度

使用市售抗体测定Cyto-Cellect® Mouse试剂盒检测小鼠IgG分子的能力。微孔板读板机的检测结果显示，商业多克隆小鼠IgG抗体显示出剂量依赖性反应（图2A&B），可检测到除IgG3外的所有单克隆抗体（图2A&B），并且试剂盒对单克隆抗体（IgG1、IgG2a和IgG2b）的总体敏感性高于所测试的多克隆小鼠IgG（EC50值，图2C）。

图2. Cyto-Cellect® Mouse试剂盒在不同商业来源的抗体存在下的FRET反应。在Cyto-Cellect® Mouse试剂盒探针存在的情况下，对市售小鼠IgG1、IgG2a和IgG2b抗体（来自两个不同供应商，A&B）以及小鼠IgG3抗体和多克隆小鼠IgG（C）进行滴定。

2 兼容性

Cyto-Cellect® Mouse试剂盒与不同培养基类型（通常用于细胞培养）的兼容性强。无论是何种培养基，Cyto-Cellect® Mouse试剂盒探针都能有效检测到滴定的多克隆抗体（图3）。此外，胎牛血清（FBS）的存在也不影响探针的检测能力。

图3. Cyto-Cellect® Mouse试剂盒的培养基兼容性。

3 特异性

Cyto-Cellect® Mouse试剂盒与小鼠IgM、人IgG或兔IgG（市售）没有交叉反应*。

图4. Cyto-Cellect® Mouse试剂盒与人、小鼠和大鼠免疫球蛋白的交叉反应性。

*大鼠IgG抗体检测到低FRET信号，但信号强度比多克隆小鼠IgG抗体低约2.5倍。

实测数据

基于Cyto-Mine®使用Cyto-Cellect® Mouse试剂盒检测分泌小鼠IgG1的杂交瘤细胞

根据杂交瘤细胞系与Cyto-Cellect® Mouse试剂盒探针孵育30 min-2 h时的FRET反应，表明大多数FRET+细胞在孵育60分钟后可检测到；将孵育时间延长至2小时则进一步增加了FRET+细胞的信号强度（图5A）。这表明，即使是很短的孵育时间，该检测方法也足以以高灵敏度检测到感兴趣的细胞。此外，基于Cyto-Mine®使用Cyto-Cellect® Mouse试剂盒分离、分配的细胞最大可能保持其活性，分配后细胞可以继续生长（分配2周后的生长情况，对照LDC，图5B）。

图5. 基于Cyto-Mine®使用Cyto-Cellect® Mouse试剂盒用于分泌IgG的杂交瘤细胞的富集和单细胞分配。

结论

Sphere Bio提供的成熟的商品化Cyto-Cellect® Mouse试剂盒可以实现小鼠IgG快速、灵敏、高兼容性和特异性的检测。

1 兼容性

Cyto-Cellect® Mouse试剂盒不仅兼容微孔板读板机和Cyto-Mine®，还兼容不同类型的培养基（经过测试的）。

2 孵育时间短

基于Cyto-Mine®使用Cyto-Cellect® Mouse试剂盒，在细胞和探针孵育60分钟后即可检测到FRET阳性的细胞。并且孵育时间越长，信号强度越高。

3 高信号强度和灵敏度

该试剂盒在微孔板读板机和Cyto-Mine®检测中均显示出良好的信号强度，FRET信号增加了4倍以上。

4 低交叉反应性

该试剂盒与人IgG、小鼠IgM、兔IgG和大鼠IgG无交叉反应/交叉反应性低。

Sphere Bio提供的Cyto-Mine®及Cyto-Mine® Chroma是集微滴生成、微滴孵育、信号检测、微滴分选和单细胞分配为一体的高度集成化和自动化平台，旨在利用微流控技术在大量细胞样品中发现罕见和有价值的细胞，有效加快抗体发现和细胞系开发的流程。用户可根据需要自由选择单根激光器或4根激光器的配置，以满足多样化的应用需求。

图6. Cyto-Mine®集成化工作流程。

参考：Josephides, D. et al Cyto-Mine®: An Integrated, Picodroplet System for HighThroughput Single-Cell Analysis, Sorting, Dispensing, and Monoclonality Assurance. SLAS TECHNOLOGY: Translating Life Sciences Innovation 247263031989257 (2020) doi:10.1177/2472630319892571.

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