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三阴性乳腺癌（TNBC）预后差、转移潜能高，现有疗法效果不佳。研究人员开展针对 TNBC 的 ROR1 靶向双特异性 T 细胞衔接器（TCE）研究。结果显示，ROR1/CD3 TCE 能有效杀伤 TNBC 细胞，诱导肿瘤消退，且半衰期延长。这为 TNBC 治疗提供了新选择。
在乳腺癌的众多类型中，三阴性乳腺癌（TNBC）就像一个 “狠角色”。它侵袭性强，患者容易复发，预后情况很不理想。TNBC 缺乏人表皮生长因子受体 2（HER2）、雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR），这使得内分泌疗法和针对 HER2 的疗法对它都没什么效果。目前，化疗和放疗虽然是常用手段，但晚期 TNBC 患者的 5 年生存率依旧很低。因此，寻找 TNBC 中特异性或异常表达的生物标志物，并以此为靶点开发药物迫在眉睫。
近年来，免疫疗法在 TNBC 治疗中崭露头角，给患者带来了新希望。不过，当前的免疫疗法只能让少数患者受益。双特异性抗体能识别两个靶点或一个靶点的不同表位，在临床上展现出了令人期待的前景。T 细胞重定向双特异性抗体可以将 T 细胞和肿瘤细胞连接起来，激活 T 细胞，从而杀死癌细胞。ROR1 是受体酪氨酸激酶（RTK）超家族的跨膜糖蛋白，在胚胎发育中有重要作用。有趣的是，它在多种肿瘤中异常表达，包括 TNBC，并且和肿瘤的侵袭性、不良预后相关，因此成为了抗癌药物开发的潜在靶点。
山西省肿瘤医院等研究机构的研究人员，为了探索 ROR1 在 TNBC 治疗中的潜力，开展了一项关于 ROR1 靶向的双特异性 T 细胞衔接器（ROR1/CD3 TCE）的研究。他们发现，ROR1/CD3 TCE 在临床前研究中展现出了良好的疗效，有望成为治疗 ROR1 阳性 TNBC 的新选择。该研究成果发表在《Breast Cancer Research》杂志上。
研究人员开展研究用到的主要关键技术方法包括：通过 RT-qPCR 和免疫组化分析检测 ROR1 的表达；利用 CRISPR/Cas9 技术构建 ROR1 基因敲除细胞；借助体外细胞毒性试验和体内人外周血单个核细胞（PBMC）重建小鼠模型，测定 ROR1/CD3 抗体对 TNBC 细胞的杀伤作用；运用流式细胞术和 ELISA 分析 ROR1/CD3 对 T 细胞的激活作用；在小鼠中进行 ROR1/CD3 的药代动力学研究。研究样本队列来源于山西省肿瘤医院收集的 50 对 TNBC 组织和相邻非癌组织。
ROR1 在 TNBC 中高表达且与预后不良相关：研究人员通过 RT-qPCR 和免疫组化分析发现，ROR1 在 TNBC 组织中的表达明显高于正常组织。进一步分析发现，ROR1 表达水平高的 TNBC 患者 5 年总生存率更低。此外，敲低 ROR1 后，TNBC 细胞的增殖受到显著抑制。这表明高表达的 ROR1 可能参与了 TNBC 的进展，是 TNBC 潜在的药物靶点。
ROR1/CD3 TCE 对 ROR1 和 CD3 具有高结合亲和力：研究人员构建了 ROR1/CD3 TCE，它由抗 ROR1 的 Fab 结构域和抗 CD3 的单链可变片段（ScFv）融合到 Fc 结构域组成，能延长半衰期。通过流式细胞术和表面等离子共振分析表明，ROR1/CD3 TCE 对 ROR1 阳性细胞和人 T 细胞都有很强的结合能力，且结合亲和力较高。
ROR1/CD3 TCE 以 ROR1 依赖的方式诱导 T 细胞激活：将人 PBMC 和 ROR1 表达的 TNBC 细胞共培养，研究发现 ROR1/CD3 TCE 能显著增加 CD4+和 CD8+ T 细胞中 CD25+CD69+双阳性细胞的比例，促进 T 细胞增殖。而在 ROR1 基因敲除的 TNBC 细胞中，没有观察到 T 细胞的激活，这说明 ROR1/CD3 TCE 对 T 细胞的激活依赖于 ROR1 抗原的识别。
ROR1/CD3 TCE 触发 T 细胞对 TNBC 细胞的细胞毒性：体外实验中，ROR1/CD3 TCE 能显著杀伤 ROR1 表达的 TNBC 细胞，而对 ROR1 阴性的 TNBC 细胞没有杀伤作用。同时，ROR1/CD3 TCE 还能显著上调多种炎症细胞因子的释放，如 IL-2、干扰素 γ（IFNγ）、IL-10、IL-4、IL-6 和肿瘤坏死因子 α（TNFα），这表明 ROR1/CD3 TCE 在体外具有强大的杀伤 ROR1 阳性 TNBC 细胞的能力。
ROR1/CD3 TCE 在体内对 ROR1 表达的 TNBC 细胞具有杀伤效力：在小鼠异种移植模型中，注射 ROR1/CD3 TCE 的小鼠肿瘤生长明显受到抑制，且小鼠体重没有明显下降，说明该药物安全性较好。另外，在另一种细胞系构建的模型中也得到了类似的结果，这证明了 ROR1/CD3 TCE 在体内具有良好的杀瘤效果。
ROR1/CD3 TCE 招募肿瘤浸润 T 细胞：注射 ROR1/CD3 TCE 后，肿瘤组织中浸润的 CD4+和 CD8+ T 细胞数量显著增加，脾脏组织中 CD4+/CD45+和 CD8+/CD45+ T 细胞的比例也明显上升。这表明 ROR1/CD3 TCE 可以重塑免疫微环境，促进 TNBC 中 T 细胞的启动和激活。
ROR1/CD3 TCE 在小鼠中具有可接受的药代动力学特征：给小鼠静脉注射 ROR1/CD3 TCE 后，研究人员检测了不同时间点的血清浓度。结果显示，ROR1/CD3 TCE 的血药浓度随时间下降，其半衰期约为 144 小时，具有良好的药代动力学参数和稳定性，这意味着在临床上可能可以采用间歇性给药的方式。
研究结论表明，ROR1/CD3 TCE 在临床前研究中展现出了特异性、强效性和稳定性，为 TNBC 的治疗提供了新的方向。不过，目前还需要在食蟹猴中进一步评估其安全性，并开展临床试验评估其对 TNBC 的治疗效果。在讨论部分，研究人员指出，虽然 ROR1 是一个很有潜力的靶点，但由于 T 细胞衔接器可能会引发细胞因子释放综合征等不良反应，未来需要优化抗体设计，在不影响杀伤效力的前提下减少细胞因子的释放。此外，ROR1/CD3 TCE 与其他疗法（如 PD-1 抗体、化疗）联合使用的效果，以及在其他实体瘤中的应用潜力，都值得进一步研究。这项研究为 TNBC 的治疗开辟了新道路，有望在未来为患者带来更好的治疗方案，提高患者的生存率和生活质量。**<
