Percepta鼻拭子分类器的分析验证：基于RNA测序技术评估肺结节肺癌风险的新型分子诊断工具

编辑推荐：针对肺结节良恶性鉴别难题，Veracyte团队开发了基于全转录组测序(RNASeq)的Percepta鼻拭子分类器(PNS)，通过分析鼻上皮基因表达特征结合临床因素，实现肺癌风险分层（高/中/低危）。研究证实该检测在CLIA实验室环境下具有优异的重现性（技术变异<2%评分范围）和抗干扰能力（耐受14%血液RNA污染），为吸烟人群肺结节管理提供了非侵入性分子诊断方案。

　　肺癌作为全球癌症死亡的首要原因，其早期诊断面临重大挑战。低剂量CT筛查虽能降低20%死亡率，但高达96%的肺结节为良性，导致过度诊疗。当前依赖临床特征和影像学的风险评估模型存在局限性，亟需新型生物标志物。Veracyte团队基于"损伤场理论"——即吸烟引起的呼吸道全上皮基因表达改变可反映肺癌风险，开发了革命性的Percepta鼻拭子分类器(PNS)。

研究团队采用多中心前瞻性队列（AEGIS研究）收集的1120例肺结节患者鼻拭子样本，通过全转录组测序(RNASeq)分析502个基因特征，结合5项临床指标构建机器学习模型。关键技术包括：1)使用CytoSoft刷采集鼻上皮细胞；2)QIAGEN miRNeasy试剂盒提取RNA；3)Illumina TruSeq RNA Access建库技术富集编码转录组；4)NextSeq 500平台进行75bp双端测序；5)STAR比对和HTSeq定量分析基因表达。

在分析验证阶段，研究通过三重实验设计验证性能：首先建立0.776分类器评分单位的最大允许变异阈值（通过10³次蒙特卡洛模拟确定）；随后评估实验室间/实验室内变异（线性混合模型显示SD=0.117，仅占评分范围1.72%）；最后测试干扰物耐受性。关键发现包括：

1. 重现性验证：30个样本在三批次实验中显示技术变异远低于生物信号（恶性/良性样本差异达4倍）
2. 抗干扰能力：RNA输入量低至15ng（标准30%）、gDNA污染达30%时结果仍稳定
3. 血液干扰阈值：建立HBB基因表达阈值排除>10%血液污染样本
4. 实验室一致性：R&D与CLIA实验室结果R²=0.98，仅3.1%临界样本分类差异

讨论部分强调，PNS首次实现非侵入性鼻上皮基因检测即可达到96%阴性预测值（NPV）和90%阳性预测值（PPV），较传统支气管镜活检显著降低创伤。该研究突破性地将"损伤场理论"应用场景扩展到门诊简易采样，其建立的14项严格质控标准（如血液RNA≤14%耐受阈值）为后续液体活检技术树立了新标杆。论文发表于《BMC Cancer》标志着肺癌早诊进入"无创分子分型"新时代，对实现精准医学目标具有里程碑意义。