澳大利亚野生马群中艰难梭菌的流行病学特征及公共卫生意义研究

本研究首次揭示澳大利亚40万野生马群中艰难梭菌（C. difficile）的携带率为11.8%，发现28种新型核糖体型（RT），其中42%菌株产毒且检出耐万古霉素（MIC=4 mg/L）菌株。通过PCR核糖体分型和抗菌药敏试验（AST），证实野生马群可作为C. difficile传播的潜在自然疫源地，为"One Health"防控策略提供重要依据。

　　

ABSTRACT
艰难梭菌（Clostridioides difficile）作为引起人和动物腹泻性结肠炎的重要病原体，其孢子形成能力和环境持久性对疾病防控构成独特挑战。澳大利亚拥有全球最大的野生马种群（约40万头），本研究首次系统调查了其作为C. difficile潜在储存库的流行病学特征。

Epidemiology
通过对5个行政辖区380份野生马粪便样本的厌氧培养，检出45株C. difficile（11.8%），显著低于澳大利亚家养马的31-38%携带率。地理分布显示显著差异：北领地检出率仅3.0%，而西澳大利亚州（16.4%）和新南威尔士/维多利亚州（15.1%）较高。40种核糖体型中，28种（70%）为新型RT，其余12种包含人类感染相关的RT014/020和RT075型。

Toxin profile variability
42%分离株（19/45）携带毒素基因，呈现6种不同毒素谱：其中5株仅含tcdA基因，3株仅含二元毒素基因（cdtA/B），8株同时携带二元毒素。值得注意的是，一株非产毒菌株在CHROMID培养基上呈现白色菌落（典型菌株为黑色），经MALDI-TOF确认为新型RT，提示常规检测可能存在漏检风险。

Antimicrobial susceptibility testing
药敏试验显示对临床常用药物总体敏感，但检出16株克林霉素耐药（36%）、2株万古霉素耐药（MIC=4 mg/L）和1株四环素耐药菌株。与家养马分离株相比，野生马株仅对利福昔明的耐药率显著降低（P=0.02），暗示抗菌药物使用压力可能驱动耐药性发展。

DISCUSSION
生态学意义：野生马群中C. difficile的携带率与北极熊（16.8%）等野生动物数据相近，支持其作为自然疫源地的假说。毒素谱的多样性（特别是单毒素株）提示需优化诊断方案，当前依赖双毒素检测的临床策略可能低估疾病负担。

进化特征：地理隔离导致菌株特异性进化，71%的RT为首次发现，包括一株esculin水解阴性变异株。这种区域性进化模式与ST11进化枝的全球分布规律相符，可能解释澳大利亚缺乏RT078型的原因。

公共卫生警示：尽管野生马接触抗菌药物机会有限，但仍检出耐万古霉素（CDI治疗药物）菌株，表明耐药基因可在自然环境中独立进化。建议将分子分型纳入监测体系，以应对这一被CDC列为最高级别AMR威胁的病原体。

MATERIALS AND METHODS
采用含环丝氨酸-头孢西丁的强化脑心浸液肉汤（BHIB-S）进行7天厌氧富集，酒精休克法筛选孢子。通过毛细管电泳PCR核糖体分型和多重毒素基因检测进行分子表征，CLSI推荐的琼脂稀释法测定10种抗菌药物的MIC值。

该研究为理解C. difficile在人类-动物-环境界面的传播动力学提供了关键数据，强调必须采用"One Health"策略应对这一持续演化的公共卫生挑战。