创新微移液管冻存法对山羊桑椹胚和囊胚移植后生育力的评估及意义

【字体: 时间:2025年04月07日 来源:Cryobiology 2.3

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  目前山羊胚胎玻璃化冷冻在桑椹胚阶段效果不佳,为解决此问题,研究人员开展了山羊桑椹胚和囊胚经 S - VitriTip 方案玻璃化冷冻后体内胚胎存活率和移植后生育力的研究。结果显示该方案有效,这对提高山羊胚胎移植技术有重要意义。

  在动物繁殖领域,胚胎冷冻保存意义重大,它不仅能助力遗传物质的国际交流,还能降低畜群和地区间疾病传播风险。目前胚胎冷冻主要有缓慢冷冻和玻璃化冷冻两种方式,其中玻璃化冷冻因能避免冰晶形成,减少细胞死亡,提升胚胎存活率,且操作简便、成本低,在小型反刍动物遗传改良项目中备受青睐。不过,对于山羊胚胎的玻璃化冷冻而言,仍存在诸多挑战。虽然玻璃化冷冻在牛和羊胚胎不同阶段的冷冻上取得了不错成果,但在山羊胚胎方面,其存活率波动较大,在 32 - 64% 之间,而且针对山羊桑椹胚玻璃化冷冻的研究较少,部分研究甚至显示其胚胎存活率为 0%。这主要是因为桑椹胚对冷冻保护剂敏感,且该阶段细胞膜通透性较高。
为了攻克这些难题,来自阿根廷国家农业技术研究所(Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria,INTA)的研究人员开展了一项研究。他们旨在评估经 S - VitriTip 方案玻璃化冷冻的山羊桑椹胚和囊胚在体内的胚胎存活率和移植后生育力。该研究成果发表在《Cryobiology》杂志上。

研究人员采用了一系列关键技术方法。首先是体内胚胎生产技术,对发情的 23 只供体山羊进行处理,从其中 19 只山羊体内获取了 103 枚(1 级和 2 级)胚胎,包括 42 枚桑椹胚和 61 枚囊胚。接着运用 S - VitriTip 方案进行胚胎玻璃化冷冻,此方案采用三种含蔗糖的玻璃化溶液,胚胎需依次在不同浓度的冷冻保护剂(甘油、乙二醇、蔗糖)溶液中处理,平衡 10.5 分钟后装入微移液管,再储存于液氮中。最后是解冻和胚胎移植,将解冻后的胚胎成对移植到 47 只受体山羊体内。

研究结果如下:

  1. 体内胚胎生产:从 19 只供体山羊中获取了 103 枚符合标准的胚胎,这些胚胎来自发情的供体山羊,在去除海绵后的第 8 天和第 9 天进行采集。不过,有 6 枚第 9 天的囊胚在冷冻前操作时透明带破裂,未进行冷冻。
  2. 胚胎冷冻及移植后评估:经 S - VitriTip 方案冷冻的胚胎解冻后进行移植,在胚胎移植后的第 25 天进行超声诊断。结果显示,根据胚胎阶段或胚胎采集日的不同,胚胎存活率和移植后生育力并无显著差异(分别为 42% 和 50%;P > 0.05)。冷冻桑椹胚的胚胎存活率为 30%,移植后生育力为 40%。

综合研究结论和讨论部分,该研究意义非凡。此次研究首次通过体内移植冷冻保存的山羊桑椹胚,获得了有效的繁殖率,充分证明了 S - VitriTip 创新玻璃化冷冻方案的有效性。该方案能减少冷冻保护剂的个体毒性,还引入了具有显著渗透作用的糖类冷冻保护剂。无论胚胎采集和移植的日期如何,该方案在从桑椹胚到囊胚的各个阶段,都展现出了良好的胚胎存活率和移植后生育力。这为山羊胚胎冷冻技术的发展提供了新的方向,有望推动山羊胚胎移植项目的进步,提高山羊繁殖效率,在山羊养殖产业中具有重要的应用前景。
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