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为探究亮丙瑞林（Leuprorelin）在大鼠体内外的代谢情况以及 NADPH 对其代谢的影响，研究人员通过体外和体内实验展开研究。结果发现大鼠肝、肾 S9 组分与人类一样存在 NADPH 依赖的代谢现象，且肾 S9 组分在无 NADPH 时与体内相关性最佳。该研究为肽类药物研发提供了重要参考。
在当今医学领域，治疗性肽（Therapeutic peptides）作为一类迅速崛起的药物，凭借独特优势备受关注。它介于蛋白质的复杂性与小分子的简单性之间，能精准模拟生物功能，在癌症、代谢紊乱、自身免疫疾病等治疗中表现出色，安全性高、毒性低。亮丙瑞林（Leuprorelin）作为合成的促性腺激素释放激素（GnRH）类似物，在临床应用广泛。然而，其代谢过程存在诸多未知。此前研究发现，在不同人源酶源中，亮丙瑞林代谢受烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）影响显著，但具体机制不明，且这种影响对体内外代谢相关性的作用也不清楚。
为解开这些谜团，来自芬兰奥卢大学（University of Oulu）研究单位的研究人员开展了一系列研究。他们希望通过研究亮丙瑞林在大鼠体内外的代谢情况，对比人与大鼠模型，评估 NADPH 对代谢的影响，深入探究 NADPH 依赖的代谢机制。
研究人员采用了多种关键技术方法。首先，运用液相色谱 - 高分辨率质谱（Liquid chromatography/high-resolution Mass Spectrometry，UPLC-HRMS）技术，对亮丙瑞林及其代谢产物进行精准分析。其次，构建了多种大鼠来源的体外模型，包括肝和肾 S9 组分、肝细胞、肾胞浆等，以及人源的肝和肾 S9 组分、胞浆等，并在这些模型中进行亮丙瑞林的孵育实验。同时，开展大鼠体内实验，给大鼠静脉注射亮丙瑞林，采集血浆样本进行分析。
研究结果如下：
- 大鼠肝脏体外模型（肝 S9 组分和肝细胞）：亮丙瑞林在所有肝脏体外模型中均发生代谢，代谢速率因系统而异。在添加 NADPH 的肝 S9 组分中，亮丙瑞林消失最快，半衰期为 3.6 分钟；无 NADPH 时，半衰期延长至 12.8 分钟，在肝细胞中最为稳定，半衰期达 26 分钟。在这些模型中总共检测到 14 种代谢产物。NADPH 显著影响亮丙瑞林的代谢产物谱，在无 NADPH 时，主要代谢产物由外肽酶形成；有 NADPH 时，代谢产物谱发生明显变化，内肽酶可能被激活。
- 大鼠肝外体外模型（肾和肠 S9 组分、血浆）：在添加 NADPH 的肾和肠 S9 组分孵育实验中，亮丙瑞林在肾中消失更快。无 NADPH 时，肾和肠 S9 组分中亮丙瑞林的半衰期分别为 84 分钟和 130 分钟。在肝外酶源孵育实验中总共检测到 10 种代谢产物。肾 S9 组分中，NADPH 存在与否对代谢产物谱影响较大；肠 S9 组分中，有无 NADPH 代谢产物谱无显著差异；亮丙瑞林在大鼠血浆中较为稳定。
- 大鼠体内结果与体外相关性：从大鼠血浆中确定了亮丙瑞林的体内代谢产物谱，总共检测到 8 种代谢产物。在大鼠体外模型中，肾 S9 组分在无 NADPH 时与体内代谢产物谱相关性最佳，能准确预测主要代谢产物。
- NADPH 依赖性的进一步研究：通过在人肝和肾 S9 组分中使用蛋白酶抑制剂，研究发现 NADPH 对亮丙瑞林代谢的影响显著，不同抑制剂对代谢产物形成有不同程度的抑制作用。在大鼠肾胞浆以及人肝和肾胞浆中添加二硫苏糖醇（DTT）的实验表明，NADPH 依赖性可能由维持细胞还原环境的过程引起。
研究结论和讨论部分指出，大鼠和人源肝脏体外酶源产生的亮丙瑞林代谢产物谱有相似之处，但肝外酶源存在种间差异。基于大鼠体内循环代谢产物，肾 S9 组分在无 NADPH 时提供了最佳的体外 - 体内相关性。亮丙瑞林在亚细胞组分中的 NADPH 依赖性代谢可通过添加 DTT 重现，说明其可能由维持细胞还原电位的过程导致。此外，研究还揭示了一些参与亮丙瑞林代谢的蛋白酶受金属肽酶抑制剂 EDTA 的影响。
这项研究意义重大，它加深了人们对亮丙瑞林代谢机制的理解，为其他治疗性肽的研究提供了参考。同时，肾 S9 组分作为新的体外模型，在治疗性肽研发中具有潜在应用价值，为未来药物研发和临床应用提供了重要依据，推动了治疗性肽领域的发展。
