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为解决由野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xcc)引起的十字花科作物黑腐病问题,研究人员开展了利用植物提取物绿色合成银纳米颗粒(AgNPs)并探究其抗菌活性的研究。结果表明,AgNPs 能有效控制 Xcc,还可诱导植物防御反应。该研究为控制植物病害提供了新途径。
在广袤的农业领域,十字花科作物家族庞大,其中甘蓝(Brassica oleracea L. )是重要的一员,像常见的卷心菜、花椰菜等都属于这个家族。它们不仅是餐桌上的常客,还具有重要的经济价值。然而,一种名为黑腐病的疾病却如幽灵般困扰着这些作物。黑腐病由野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xcc)引起,这种革兰氏阴性菌会在叶片表面附生,通过多种途径侵入植物,在维管束系统中定植,导致叶片出现 V 形黄化、叶脉变黑、坏死等症状,严重影响作物的产量和品质 。
传统的防治方法,如使用无 Xcc 的种植材料、清除感染植株残体和轮作,效果有限,而广泛使用的化学药剂又对人类健康和环境有害。在这样的困境下,寻找一种高效、可持续的防治策略迫在眉睫。
巴西 Embrapa 遗传资源和生物技术中心的研究人员挺身而出,开展了一项极具意义的研究。他们利用绿色合成的方法,使用来自卷心菜(Brassica oleracea var. capitata L.)、拟南芥(Arabidopsis thaliana [L.] Heynh)、印楝(Azadirachta indica L.)和诺丽果(Morinda citrifolia L.)的叶子及果实部分(果皮和果肉 / 种子)的水提取物作为还原剂和稳定剂,合成了银纳米颗粒(AgNPs),并探究其对 Xcc 的抗菌活性以及在植物体内的作用机制。研究成果发表在《Discover Plants》上。
研究人员在实验过程中运用了多种关键技术方法。首先是植物材料处理与水提取物制备,选取健康的植物材料,经过清洗、研磨、称重等步骤,再通过煮沸、过滤等操作获得水提取物 。接着进行 AgNPs 的绿色合成与表征,利用不同浓度的水提取物与硝酸银(AgNO3)反应合成 AgNPs,并使用动态光散射(DLS)、原子力显微镜(AFM)等技术对其进行表征 。此外,还通过体外抗菌活性测定、RT-qPCR 分析防御相关基因表达以及致病性测定等实验,深入探究 AgNPs 的抗菌效果和作用机制。
在研究结果部分:
- AgNPs 的生成与特性:通过 UV-Vis 光谱分析监测 AgNPs 的合成过程,发现不同植物提取物合成的 AgNPs 具有独特的物理化学性质。随着提取物浓度变化,AgNPs 的颜色和光吸收强度改变。DLS 分析显示,不同提取物合成的 AgNPs 在流体动力学直径(HD)、多分散指数(PDI)和 Zeta 电位上存在差异,且浓度对这些性质有影响。AFM 图像表明,以 60mg/mL 诺丽果果皮水提取物(AENFP)合成的 AgNPs 呈球形,周围有来自 AENFP 的无定形物质。
- AgNPs 对 Xcc 的抗菌作用:基于物理化学特性,挑选 14 种 AgNPs 悬浮液进行体外抗菌活性测试。结果显示,部分 AgNPs 具有抗菌活性,其中 AENFP-AgNPs 在 60mg/mL 浓度下合成的产物,HD 值最低(192.3±1.1nm) ,在 64μmol/L 浓度时对 Xcc51 的抗菌活性最高,是控制黑腐病病原体的最有潜力候选悬浮液。
- AENFP-AgNPs 对植物防御基因的影响:利用 qRT-PCR 分析发现,用 AENFP-AgNPs 处理甘蓝植物后,8 个防御相关生物标志物基因中有 5 个表达发生变化,Defensin-like(DEFL)、Oxoglutarate-dependent dioxygenase(DAO)、Fatty acid desaturase(FADS)和 Pathogen-induced defense-responsive protein 8(PIDRP8)基因上调,Stromal ascorbate peroxidase(SAPX)基因下调,表明 AENFP-AgNPs 能触发植物有效的防御反应。
- AENFP-AgNPs 对植物抗病性的影响:对 AENFP-AgNPs 处理后的植物接种 Xcc,结果显示,处理后的植物叶片黑腐病症状延迟出现,受伤叶面积显著减少,直至接种后 7 天仍有明显效果,说明 AENFP-AgNPs 能提高植物对黑腐病的耐受性。
研究结论和讨论部分指出,本研究成功利用不同植物水提取物合成了具有不同特性的 AgNPs,其中 AENFP-AgNPs 在控制 Xcc 和诱导植物系统获得性抗性(SAR)方面表现出色。它能够激活植物体内特定防御相关基因的表达,有效减少黑腐病症状,延缓疾病进展。这一研究成果为十字花科作物黑腐病的防治提供了一种全新的策略,也为纳米生物技术在农业领域的应用开辟了新方向,有助于减少农业生产对有害化学农药的依赖,推动可持续农业的发展。