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为探究中性粒细胞胞外陷阱（NETs）在胃损伤中的作用及形成机制，成都中医药大学研究人员以吲哚美辛诱导小鼠胃损伤模型开展研究。结果表明，NETs 形成在胃损伤中起关键作用，IL-17 信号通路或为 NETs 形成关键机制，该研究为胃损伤治疗提供新方向。
在人体这个复杂的 “小宇宙” 里，胃黏膜就像一层精密的防护盾，守护着我们的健康。然而，非甾体抗炎药（NSAIDs）却可能打破这层平衡，引发胃损伤，其中吲哚美辛是 “罪魁祸首” 之一，它导致的胃损伤是胃溃疡的第二大诱因。一直以来，中性粒细胞与吲哚美辛诱导的胃损伤之间的关系犹如一团迷雾，亟待揭开。为了驱散这团迷雾，成都中医药大学的研究人员挺身而出，开展了一项意义重大的研究，相关成果发表在《Scientific Reports》上。
在这项研究中，研究人员主要运用了以下几种关键技术方法：首先，构建了吲哚美辛诱导的小鼠胃损伤模型，为后续研究提供了基础；其次，运用蛋白质组学分析，全面探究胃损伤相关的蛋白变化；此外，通过单细胞 RNA 测序（scRNA-seq），深入挖掘细胞内的分子机制。
下面来看看具体的研究结果：
- 吲哚美辛引发小鼠胃黏膜损伤：给小鼠灌胃吲哚美辛后，与对照组相比，模型组小鼠胃黏膜出现明显的损伤、变性和坏死，同时炎症因子 TNF-α 和 IL-1β 水平显著升高，这表明 30mg/Kg 的吲哚美辛灌胃可导致严重的胃黏膜损伤和炎症。
- 蛋白质组学质量控制与差异蛋白筛选：对蛋白质组学进行质量控制，结果显示大部分肽段长度在 7 - 20 个氨基酸之间，符合质谱碎片化标准，且零错切肽段比例达 76.06%，说明质量控制结果令人满意。通过分析，鉴定出 346 个上调和 203 个下调的蛋白质。
- 富集分析揭示 NETs 在吲哚美辛诱导胃损伤中的重要作用：GO 分类富集和 KEGG 富集分析表明，差异蛋白主要在免疫系统过程、炎症反应、先天免疫反应以及 NETs 形成等途径富集。ELISA 检测发现，模型组胃组织中 MPO - DNA 浓度显著增加，这意味着 NETs 形成增多。
- 免疫荧光双标观察 NETs：免疫荧光双标结果显示，模型组胃黏膜层和黏膜下层中，瓜氨酸化组蛋白 H3（H3Cit）和髓过氧化物酶（MPO）阳性区域百分比均显著高于对照组，且黏膜层中两者的共表达也明显增加，这进一步表明吲哚美辛可诱导 NETs 形成。
- 吲哚美辛在体外促进 NETs 形成：在体外实验中，分离的中性粒细胞经台盼蓝染色显示活力为 94.74%，且成功提取。添加 200μL、400μL 和 600μL 吲哚美辛后，MPO - DNA 浓度显著增加，说明吲哚美辛可在体外诱导 NETs 过度形成。
- 胃损伤小鼠中观察到 GECs 的程序性细胞死亡：透射电镜（TEM）观察发现，模型组小鼠胃上皮细胞（GECs）出现线粒体肿胀和细胞膜穿孔等现象，同时凋亡相关蛋白 Apaf - 1、Caspase - 1、Gasdermin D 和 Cyto C 的表达显著升高，表明吲哚美辛灌胃后，GECs 发生了明显的程序性细胞死亡。
- 抑制 NETs 减轻小鼠吲哚美辛诱导的胃损伤：使用 NETs 抑制剂 DNase 1 后，与模型组相比，模型 + DNase 1 组胃黏膜损伤明显减轻，炎症因子水平降低，这表明抑制 NETs 可有效减轻吲哚美辛诱导的胃损伤。
- NETs 形成导致体外 GECs 程序性细胞死亡：体外实验表明，与 NEU 组和 NEU + GEC 组相比，NEU + GEC + Indo 组中 GECs 的程序性细胞死亡增加，这进一步证明了 NETs 形成与 GECs 程序性细胞死亡之间的关联。
- scRNA - Seq 揭示吲哚美辛诱导胃损伤小鼠外周血中中性粒细胞富集：scRNA - Seq 分析发现，与对照组相比，模型组小鼠外周血中中性粒细胞显著激活，且中性粒细胞相关标记基因表达增加，这表明中性粒细胞在吲哚美辛诱导的胃损伤小鼠外周血中富集。
- IL-17 信号通路可能是 NETs 形成的关键细胞内机制：对中性粒细胞进行富集分析发现，差异表达基因主要富集在中性粒细胞脱颗粒、先天免疫系统和免疫系统，且 KEGG 富集分析表明差异表达基因与 IL - 17 信号通路相关。免疫荧光双标显示，模型组胃黏膜中 MPO 和 IL - 17R 阳性区域百分比及共表达显著增加，且胃组织中 IL - 17 浓度也明显升高，这初步证实了 IL - 17 信号通路在吲哚美辛诱导的胃损伤和 NETs 形成中起重要作用。
综合来看，该研究通过体内外实验证实了 NETs 形成在吲哚美辛诱导的胃损伤中起着至关重要的作用，它促进了 GECs 的程序性细胞死亡，进而加剧了胃黏膜损伤。同时，研究还发现 IL - 17 信号通路可能是 NETs 形成的关键细胞内机制。这一研究成果为深入理解胃损伤的发病机制提供了新的视角，也为未来胃损伤的治疗提供了潜在的新靶点，有望推动相关治疗方法的研发，为广大患者带来新的希望。
