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这篇综述聚焦于免疫细胞改造的前沿抗癌研究。细胞外囊泡（EVs）在肿瘤微环境（TME）中作用关键，可作多种抗癌工具。研究探索操纵树突状细胞（DCs）、自然杀伤（NK）细胞和 T 细胞分泌具免疫功能的 EVs，提升抗癌疗效，同时探讨了面临的障碍与改进建议。
### 细胞外囊泡（EVs）在癌症研究中的重要地位
细胞外囊泡（EVs）作为细胞间通信的重要介质，在肿瘤微环境（TME）内发挥着极为关键的作用。肿瘤微环境是肿瘤细胞生长、增殖和转移的复杂环境，其中存在多种细胞类型，包括肿瘤细胞、免疫细胞、间质细胞等。EVs 就像是这些细胞之间传递信息的 “小包裹”，它能携带蛋白质、核酸、脂质等多种生物活性分子，在细胞间穿梭，实现细胞间的物质交换与信息传递，进而影响肿瘤的发生、发展进程。
基于 EVs 具有的抗肿瘤潜力、安全性、生物相容性以及理化稳定性等优势，它在癌症研究领域展现出了巨大的应用价值。在临床诊断方面，EVs 可作为非侵入性的诊断工具。传统的癌症诊断方法，如组织活检，往往具有一定的创伤性，给患者带来痛苦，且可能存在取样误差。而 EVs 可从血液、尿液等体液中获取，通过检测其中特定的生物标志物，能够实现癌症的早期诊断，为患者争取宝贵的治疗时间。在药物递送系统方面，EVs 可以包裹化疗药物、靶向药物等，将药物精准地递送至肿瘤细胞，提高药物疗效的同时，降低对正常组织的毒副作用。此外，EVs 还能作为癌症疫苗，激活机体的免疫系统，增强机体对肿瘤细胞的免疫监视和杀伤能力。
免疫细胞修饰在癌症研究中的发展
免疫细胞修饰，包括基因层面和表观遗传层面的修饰，正逐渐成为癌症研究领域的热门方向。这一领域旨在通过改变免疫细胞的特性，增强免疫治疗的效果。免疫治疗是利用人体自身的免疫系统来对抗癌症的治疗方法，相比传统的手术、化疗和放疗，具有特异性强、副作用小等优点。然而，目前免疫治疗的疗效仍有待提高，部分患者对免疫治疗的反应不佳。
对免疫细胞进行修饰，能够增强免疫细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤能力。例如，通过基因编辑技术，如 CRISPR-Cas9 系统，可以对免疫细胞的基因进行精准编辑，使其表达特定的受体或蛋白，提高免疫细胞对肿瘤抗原的亲和力，增强免疫细胞的活化和增殖能力，从而更有效地攻击肿瘤细胞。表观遗传修饰则是通过调节基因的表达水平来影响免疫细胞的功能，如 DNA 甲基化、组蛋白修饰等，这些修饰可以在不改变基因序列的情况下，改变免疫细胞的表型和功能，为免疫治疗开辟新的途径。
修饰免疫细胞分泌的 EVs 抗癌机制
- 树突状细胞（DCs）分泌的 EVs：树突状细胞（DCs）是免疫系统的 “哨兵”，具有强大的抗原呈递能力。修饰后的 DCs 分泌的 EVs 可以携带肿瘤抗原，当这些 EVs 进入体内后，能够被其他免疫细胞，如 T 细胞识别。T 细胞表面的 T 细胞受体（TCR）与 EVs 上的肿瘤抗原结合，激活 T 细胞，启动免疫应答。DCs 分泌的 EVs 还可以调节免疫细胞的行为，例如促进 T 细胞向肿瘤部位迁移，增强 T 细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，从而提高抗癌效果。
- 自然杀伤（NK）细胞分泌的 EVs：自然杀伤（NK）细胞是固有免疫系统的重要组成部分，能够非特异性地识别和杀伤肿瘤细胞。修饰后的 NK 细胞分泌的 EVs 含有多种细胞毒性物质，如穿孔素、颗粒酶等。当这些 EVs 与肿瘤细胞接触时，穿孔素可以在肿瘤细胞膜上形成小孔，颗粒酶通过小孔进入肿瘤细胞内，激活细胞凋亡途径，导致肿瘤细胞死亡。NK 细胞分泌的 EVs 还可以调节免疫细胞的功能，如激活巨噬细胞，增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用，进一步提高机体的抗肿瘤免疫反应。
- T 细胞分泌的 EVs：T 细胞在适应性免疫应答中发挥核心作用。修饰后的 T 细胞分泌的 EVs 同样携带肿瘤抗原，并且可以表达共刺激分子，如 CD80、CD86 等。这些共刺激分子与 T 细胞表面的相应受体结合，能够进一步激活 T 细胞，增强 T 细胞的免疫活性。T 细胞分泌的 EVs 还可以调节肿瘤微环境中的免疫细胞平衡，抑制肿瘤细胞的免疫逃逸，使肿瘤细胞更容易被免疫系统识别和清除。
修饰免疫细胞分泌 EVs 抗癌面临的障碍
- 制备与纯化技术难题：目前，获取修饰免疫细胞分泌的 EVs 在制备和纯化过程中存在诸多挑战。从细胞培养到 EVs 的分离、纯化，每一步都需要严格的操作条件和高质量的设备。不同的细胞培养条件可能会影响 EVs 的产量和质量，例如培养基的成分、培养温度、气体环境等。在分离和纯化过程中，现有的技术方法，如超速离心、超滤、免疫亲和捕获等，都存在一定的局限性。超速离心法虽然应用广泛，但操作繁琐、耗时较长，且可能会导致 EVs 的聚集和损伤；超滤法容易造成 EVs 的损失，免疫亲和捕获法则成本较高，且特异性依赖于抗体的质量，这些问题都限制了修饰免疫细胞分泌 EVs 的大规模制备和临床应用。
- 体内递送效率问题：即使成功制备了修饰免疫细胞分泌的 EVs，如何将其高效地递送至肿瘤部位也是一个关键问题。在体内，EVs 会面临多种生理屏障，如血液循环中的蛋白质吸附、巨噬细胞的吞噬等。当 EVs 进入血液循环后，血液中的蛋白质会迅速吸附在其表面，形成蛋白冠，改变 EVs 的表面性质，影响其靶向性。巨噬细胞会识别并吞噬 EVs，导致大部分 EVs 在到达肿瘤部位之前就被清除。此外，肿瘤组织具有复杂的结构和微环境，EVs 难以穿透肿瘤组织的细胞外基质，到达肿瘤细胞所在位置，这大大降低了 EVs 的治疗效果。
- 免疫原性问题：修饰免疫细胞分泌的 EVs 可能会引发机体的免疫反应。尽管 EVs 来源于自身免疫细胞，但修饰过程可能会改变 EVs 的表面成分，使其被免疫系统识别为外来异物。当机体免疫系统识别到这些 EVs 后，会产生抗体，中和 EVs 的活性，甚至引发免疫排斥反应，导致 EVs 无法发挥正常的抗癌作用。此外，长期使用修饰免疫细胞分泌的 EVs 还可能会导致免疫系统的过度激活，引发一系列不良反应，如炎症反应、自身免疫性疾病等，这也限制了其临床应用。
提高修饰免疫细胞分泌 EVs 抗癌效果的建议
- 优化制备与纯化技术：研发新的细胞培养体系，优化培养基成分，采用无血清、化学成分明确的培养基，减少批次间差异，提高 EVs 的产量和质量。改进分离和纯化技术，结合多种方法的优势，如将超速离心与免疫亲和捕获相结合，开发新型的微流控芯片技术，实现 EVs 的高效、快速分离和纯化，降低生产成本，为大规模生产提供技术支持。
- 改善体内递送策略：对 EVs 进行表面修饰，如在 EVs 表面连接靶向配体，使其能够特异性地识别肿瘤细胞表面的受体，提高 EVs 的靶向性。例如，将肿瘤特异性抗体或肽段连接到 EVs 表面，引导 EVs 精准地到达肿瘤部位。利用纳米技术，制备纳米载体包裹 EVs，增强 EVs 的稳定性，减少其在血液循环中的清除，提高其在肿瘤组织中的富集效率。此外，还可以联合其他治疗方法，如局部给药、超声介导的递送等，提高 EVs 的体内递送效率。
- 降低免疫原性：深入研究 EVs 的免疫原性机制，通过基因工程技术或化学修饰方法，调整 EVs 的表面成分，降低其免疫原性。例如，敲除或沉默 EVs 表面可能引发免疫反应的基因，或者对 EVs 表面的蛋白进行化学修饰，掩盖其免疫原性位点。在临床应用中，根据患者的个体差异，制定个性化的治疗方案，监测患者的免疫反应，及时调整治疗策略，减少免疫相关不良反应的发生。
综上所述，修饰免疫细胞分泌的外泌体（EVs）作为一种新兴的抗癌策略，具有巨大的潜力。通过激活免疫反应、改变免疫细胞行为，能够有效增强抗肿瘤疗效。然而，目前该方法仍面临制备与纯化技术难题、体内递送效率问题以及免疫原性等障碍。通过优化制备与纯化技术、改善体内递送策略、降低免疫原性等措施，有望进一步提高修饰免疫细胞分泌 EVs 的抗癌效果，为癌症治疗开辟新的途径，为广大癌症患者带来新的希望。
