新型“prime/pull/keep”疫苗策略通过CXCL-11/IL-2/IL-15增强HSV-1特异性CD8+ T细胞组织驻留能力有效防治眼部疱疹感染

本研究创新性地提出“prime/pull/keep”（PPK）疫苗策略，通过T细胞表位肽（prime）、趋化因子CXCL-11（pull）和细胞因子IL-2/IL-15（keep）的协同作用，显著提升HSV-1特异性CD8+ T细胞在三叉神经节（TG）和角膜组织的驻留（TRM），首次在HLA-A*0201转基因兔模型中证实该方案可降低病毒载量并减轻角膜病变，为开发抗疱疹治疗性疫苗提供了新思路。

　　

研究背景
疱疹病毒1型（HSV-1）是全球最常见的病毒感染之一，约37亿人感染，其中眼部感染可导致从结膜炎到威胁视力的疱疹性基质角膜炎（HSK）。尽管抗病毒药物如阿昔洛韦能缓解症状，但对45%患者无效，亟需新型疫苗策略。既往研究显示，驻留在三叉神经节（TG）和角膜的CD8⁺ T细胞对控制HSV-1潜伏感染再激活至关重要，但传统疫苗难以诱导足够数量的效应T细胞定植于这些免疫豁免组织。

疫苗设计创新
研究团队设计了两款基于腺相关病毒8型（AAV8）载体的“prime/pull/keep”（PPK）疫苗：

1. Prime组分：包含10个来自HSV-1糖蛋白（gD/gB）、病毒被膜蛋白（VP11/12、VP13/14）和DNA解旋酶（UL9）的HLA-A*0201限制性CD8⁺ T细胞表位（如gD_53-61、gB_342-350等），以及3个CD4⁺ T辅助表位，通过AAY/GPGPG连接子串联表达。
2. Pull组分：神经趋向性CamKIIα启动子驱动的CXCL-11趋化因子，可招募T细胞至感染部位。
3. Keep组分：IL-2或IL-15细胞因子，维持T细胞在组织中的长期驻留。

动物模型验证
采用高表达HLA-A*0201的转基因兔模型，其优势在于：

• 自发HSV-1再激活（不同于小鼠模型）
• 角膜免疫隔离特性与人类相似
• 可检测人类表位特异性T细胞应答
  实验设计分为三个阶段：

1. 感染期：兔眼接种HSV-1 McKrae株（1×10⁵ PFU）
2. 治疗期：感染30天后，PPK疫苗组接受AAV8-PPK1（含IL-2）和PPK2（含IL-15）联合滴眼，对照组用空载体
3. 评估期：监测28天内的角膜病变、泪液病毒载量及T细胞应答

关键发现

1. 临床保护效果

• PPK组角膜病变面积显著减小（P<0.005），荧光素染色显示损伤减少
• 泪液HSV-1 DNA拷贝数降低5倍以上
• 组织病理显示TG和角膜中CD8⁺/CD4⁺ T细胞浸润增加

2. 免疫机制解析

• T细胞频率提升：PPK组TG中显性表位（如gD_53-61）特异性CD8⁺ T细胞数量增加2-5倍
• 记忆表型分化：
  • CD44⁺CD62L^-效应记忆T细胞（T_EM）占比升高
  • CD69⁺CD103⁺组织驻留记忆T细胞（T_RM）显著富集
  • CD4⁺ T_RM细胞同步增加
• 靶向性迁移：脾脏和血液中HSV特异性T细胞无显著差异，证实PPK疫苗精准调控局部免疫

研究意义
该研究首次在大型动物模型中验证了PPK策略的三大核心价值：

1. 表位选择：源自无症状感染者（ASYMP）的T细胞表位具有更强保护性
2. 递送优化：AAV8载体联合神经趋向性启动子实现角膜/TG靶向表达
3. 协同机制：CXCL-11与IL-2/IL-15形成“招募-驻留”闭环，突破免疫豁免屏障
   为开发抗HSV治疗性疫苗提供了全新范式，未来可拓展至其他神经嗜性病毒感染防治。