狂犬病毒株差异性感染树突状细胞的比较分析：揭示天然感染中免疫逃逸机制

本研究通过对比两种致病性狂犬病毒株（SHBRV和dogRV）与减毒疫苗株（SAD P5）对人单核细胞源性树突状细胞（moDCs）的感染差异，揭示了病毒株特异性免疫激活缺陷。研究发现仅高剂量SHBRV和SAD P5能感染moDCs并诱导轻微成熟表型，但不足以激活T细胞反应，而dogRV完全无法感染。该成果为理解狂犬病毒天然感染中适应性免疫应答缺失提供了关键实验证据，提示靶向DC激活或成治疗新策略。

　　

引言

狂犬病毒（RABV）作为最古老的病毒性疾病之一，每年导致全球超6万人死亡，其致命性源于天然感染中病毒特异性免疫应答的缺失。尽管现有暴露后治疗可有效预防发病，但贫困地区仍面临疫苗可及性挑战。研究聚焦RABV与先天免疫细胞——特别是树突状细胞（DCs）的早期互作，因其在启动适应性免疫中的核心作用。既往研究表明，单核细胞源性巨噬细胞（moMacs）在RABV暴露后呈现独特转录组特征但缺乏激活，提示DC功能异常可能是免疫失败的关键环节。

结果

moDCs的病毒株依赖性感染

实验发现，人moDCs仅对蝙蝠源SHBRV和疫苗株SAD P5易感，而犬源dogRV完全无法感染。免疫荧光显示SHBRV和SAD P5在胞内形成核蛋白（RABV-N）复制簇，流式检测感染率在MOI=5时达4.8-10.9%。病毒滴度测定证实SHBRV和SAD P5在moDCs中可增殖，而dogRV无复制能力。

差异化的免疫激活

高剂量SHBRV和SAD P5暴露上调moDCs成熟标志物（CD80/CD86/HLA-DR/PD-L1），但幅度远低于LPS刺激。感染细胞（RABV-N⁺）亚群激活更显著，但其占比低（<11%）。细胞因子检测显示SHBRV-MOI5组TNF-α/IP-10/IFN-β轻微升高，而dogRV无响应。迁移标记CCR7表达增加，但CCR1/2/5未下调，提示迁移功能可能受损。

T细胞激活失败

共培养实验表明，RABV暴露的moDCs无法增强自体T细胞增殖（仅5% vs LPS组12.5%）。细胞因子谱无规律性变化，反映抗原提呈功能缺陷。

LPS应答保留

预暴露于SHBRV或SAD P5的moDCs对LPS反应未受抑制，反而高剂量组呈现协同激活，表明RABV未诱导免疫麻痹。

讨论

研究揭示了RABV株间感染性与免疫激活的显著差异：

1. 糖蛋白（G蛋白）依赖性：dogRV的感染失败可能源于其G蛋白与moDCs受体结合效率低；
2. 复制依赖性激活：仅能复制的SHBRV/SAD P5触发有限免疫反应，提示病毒RNA（如RIG-I识别的leader RNA）可能是激活信号；
3. 临床相关性：moDCs的低水平感染与微弱激活或解释天然感染中抗体延迟产生，而疫苗株SAD P5的类似反应暗示其免疫原性需优化；
4. 治疗靶点：增强DC迁移（如CCR7）或共刺激信号（如CD40）或可突破免疫沉默。

材料与方法

采用人外周血CD14⁺单核细胞分化为moDCs，暴露于MOI 0.1-5的RABV株。通过TCID₅₀、流式细胞术（检测CD83/CCR7等）、共聚焦显微镜（RABV-N定位）及多因子检测（LEGENDplex）综合分析。

该研究为RABV免疫逃逸机制提供了细胞水平证据，为开发靶向DC的免疫干预策略奠定基础。