IgM 特异性蛋白酶：消除免疫分析干扰、简化 IgM 分型的创新工具

为解决免疫分析中 IgM 干扰及 IgM 分型复杂的问题，研究人员开展了 IgM 特异性蛋白水解切割在常规免疫原性检测中效用的研究。结果表明，该蛋白酶可消除类风湿因子（RF）干扰、简化 IgM 分型，还能揭示抗衣壳 IgG 检测中的 IgM 干扰，对免疫分析意义重大。

　　在免疫分析的领域里，就如同在一个精密的仪器中，时常会出现一些 “捣乱分子” 影响结果的准确性。类风湿因子（RF）大多是 IgM，它在常规免疫原性检测中，就像一个调皮的 “小恶魔”，会干扰对单克隆抗体（mAbs）和 Fc 融合蛋白的检测，导致检测信号增加，出现假阳性结果 。这不仅影响了免疫原性检测，在诊断和药物监测免疫分析中也会造成严重后果，比如导致误诊和过度治疗。而且在一些特殊的检测中，如抗衣壳 IgG 检测，共存的 IgM 会掩盖衣壳表位，干扰检测结果，对于基因治疗的免疫原性检测和风险管理产生不利影响。

为了解决这些问题，来自 Roche Pharma Research & Early Development（pRED）的 Alexander P?hler、Uwe Wessels、Roland F. Staack、Kay-Gunnar Stubenrauch 以及 Genovis AB 的 Maria Nordgren、Rolf Lood 开展了相关研究。他们的研究成果发表在《The AAPS Journal》上，为解决免疫分析中的难题提供了新的方向。

研究人员主要运用了以下关键技术方法：使用 IgM 特异性蛋白酶（IgMBRAZOR?）处理样本，该蛋白酶能特异性切割 IgM；通过凝胶电泳定性分析免疫球蛋白的消化情况；采用多种免疫分析方法，包括抗药物抗体（ADA）桥接检测、IgG 和 IgM 特异性检测、抗腺相关病毒 2（AAV2）免疫复合物检测等，同时使用了人及食蟹猴血清样本。

下面来看具体的研究结果：

• IgM 切割蛋白酶的特异性：新引入的商业蛋白酶能特异性地从基质中去除 IgM。它在 IgM 重链 Cμ₂结构域下方的特定位点切割，产生五个 F (ab′)₂等效物和一个五聚体 J 偶联 Fc 核心 。实验显示，该蛋白酶对人和猴的 IgM 具有高特异性，基本不会影响非 IgM 抗体。
• 减轻类风湿因子（RF）干扰：在针对 mAb 药物 X 的 ADA 桥接检测中，类风湿关节炎患者样本出现明显检测信号，而健康供体血清池无信号，说明这些信号是由 RF 干扰而非 ADA 引起。经蛋白酶处理后，患者样本的检测信号消失，而阳性对照（人抗药物 X IgG）不受影响，证实了信号源于 IgM 抗体。在 IgM ADA 检测和 IgG 特异性检测中也观察到类似现象，进一步证明了 IgM 消化对检测性能无影响。
• IgM 分型：分析健康供体样本中针对 mAb 药物 Y 的预先存在的 ADA 时发现，在桥接检测中，蛋白酶处理使 8 个样本中的 6 个检测信号显著抑制（65 - 97%），表明这些样本的检测信号主要源于 IgM ADA。在 IgM 检测中，这 6 个样本信号强；在 IgG 检测中，桥接检测中蛋白酶处理无影响的样本（样本 7 和 8）信号强，说明这些样本的信号可能源于 IgG ADA，再次证实了蛋白酶的 IgM 特异性。
• 抗衣壳抗体的检测：在分析食蟹猴样本中治疗后产生的抗 AAV2 抗体时，蛋白酶处理使 IgM 检测中的所有样本信号消失，说明这些信号是针对抗 AAV2 IgM 的。令人惊讶的是，在 IgG 检测中，蛋白酶处理后信号显著增加，这表明共存的抗 AAV IgM 会掩盖抗 AAV IgG 的衣壳表位，从而影响 IgG 检测中抗衣壳免疫反应的检测。

研究结论和讨论部分表明，IgM 特异性蛋白酶可有效减轻免疫分析中的 IgM 干扰，简化 IgM 分型，还能揭示并处理未知的 IgM 干扰，如本研究中抗 AAV2 IgG 检测中的干扰。该方法实用性高，可快速应用于不同检测中，且不会影响检测的可靠性和性能。由于其对人和猴 IgM 的特异性，可用于临床和临床前药物研发。这一研究成果为免疫分析领域带来了新的希望，为后续研究和实际应用提供了重要的参考依据，有望成为广泛分析应用的开创性平台。