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为探究小柴胡汤（XCHT）对慢性应激（CRS）诱导的结直肠癌（CRC）的作用，研究人员通过构建动物模型、结合网络药理学和 RNA 测序等技术展开研究。结果发现 XCHT 可抑制肿瘤生长，改善炎症微环境。这为 CRC 治疗提供了新策略。
在健康与疾病的领域中，结直肠癌（CRC）宛如一颗 “健康炸弹”，严重威胁着人类的生命安全。据 GLOBOCAN 2020 统计，CRC 的发病率位居全球第三，死亡率更是高居第二。而慢性心理应激作为一个重要的环境因素，不仅增加了肿瘤发生和癌症死亡率，还让癌症患者的预后雪上加霜，与 CRC 的进展密切相关。与此同时，肿瘤细胞为了适应恶劣的生存环境，会进行能量代谢重编程，就像 “叛变的士兵”，偏好糖酵解而非正常的氧化磷酸化。白细胞介素 6（IL-6）以及 Janus 激酶 2（JAK2） - 信号转导和转录激活因子 3（STAT3）信号通路在癌症发展中 “兴风作浪”，激活后促进肿瘤的增殖、侵袭和转移。
在这样的背景下，传统中药小柴胡汤（XCHT）进入了研究人员的视野。它在治疗情绪和焦虑障碍方面有着良好的效果，还具备抑制肿瘤生长的潜力。那么，XCHT 在慢性应激诱导的 CRC 中究竟扮演着怎样的角色呢？上海中医药大学的研究人员带着这样的疑问，踏上了探索之旅。
研究人员首先精心制备了 XCHT 配方，其包含柴胡（Bupleurum chinense DC）、半夏（Pinellia ternata (Thunb.) Makino）等 7 种草药。接着，构建了 CRS 小鼠模型以及皮下肿瘤模型。他们将 MC38 细胞注入小鼠体内，并把小鼠随机分为对照组、CRS 组、CRS + XCHT-L 组、CRS + XCHT-H 组和 CRS + 氟西汀（FXT）组。
在研究过程中，研究人员运用了多种关键技术方法。通过 RNA 测序分析肿瘤组织的基因表达变化；借助网络药理学，从数据库中筛选 XCHT 的活性成分和潜在靶点；利用 ELISA、RT-qPCR、免疫荧光、蛋白质免疫印迹（Western blot）等实验技术检测相关基因和蛋白的表达水平；采用细胞计数试剂盒 - 8（CCK-8）法、克隆形成实验等评估细胞的增殖能力。
研究结果如下：
- XCHT 改善小鼠抑郁样行为：通过旷场实验（OFT）发现，CRS 模型小鼠出现抑郁样行为，表现为总移动距离、进入中心次数和在中心停留时间减少，休息时间增加。而 XCHT 给药明显改善了这种状态，让小鼠的行为更接近正常水平。
- XCHT 抑制慢性应激下结直肠癌生长：在体内实验中，CRS 显著加速了肿瘤生长，使肿瘤体积更大、重量更重。但 XCHT 能以剂量依赖的方式显著抑制肿瘤生长和减轻肿瘤重量，并且高剂量的 XCHT 还能阻断慢性应激对 Ki-67 指数的促进作用。在体外实验中，XCHT 对 HT-29 和 HCT-116 细胞的活力没有影响，但能抑制从 CRS 组异种移植物分离的细胞的增殖，且浓度越高抑制效果越明显。
- XCHT 调节慢性应激下 CRC 的基因表达：RNA 测序分析显示，与对照组相比，慢性应激导致基因表达发生变化，而 XCHT 处理组与应激组相比，基因表达谱有显著差异。KEGG 分析揭示了 XCHT 处理后显著改变的信号通路，研究人员重点关注细胞因子 - 细胞因子受体相互作用和趋化因子信号通路。
- 网络药理学分析：通过数据库筛选，确定了 XCHT 的 124 种活性成分和 905 个潜在药物靶点蛋白。经过匹配，找到 576 个与抑郁和 CRC 相关的共享靶点，最终确定 131 个潜在靶点用于 XCHT 治疗与抑郁相关的 CRC。GO 和 KEGG 分析发现，这些靶点涉及 PI3K-Akt 通路、脂质通路和 HIF-1 信号通路等。
- XCHT 通过 IL-6 抑制 CRS 下的 CRC 生长：RNA 测序数据显示，CRS 后 IL-6、IL-12 等细胞因子表达上调，XCHT 处理可减轻 IL-6 和 IL-12 的增加。ELISA 检测发现，血浆中 IL-6 和 IL-12 水平在慢性应激下升高，XCHT 处理后降低。进一步研究发现，IL-6 能促进 MC38 细胞增殖，而 XCHT 可剂量依赖性地抑制这种增殖作用。
- XCHT 调节 CRS 下 CRC 的免疫细胞浸润：免疫组化结果表明，CRS 抑制了 CD4+和 CD8+细胞的浸润，XCHT 处理明显逆转了这种抑制作用。同时，XCHT 还降低了 F4/80 巨噬细胞的浸润水平，这表明 XCHT 可通过改善小鼠的免疫功能来抑制 CRC 生长。
- XCHT 抑制 CRS 介导的 IL-6/JAK2/STAT3 通路激活：实验表明，IL-6 可诱导 STAT3 磷酸化，XCHT 能抑制 IL-6 对 STAT3 磷酸化的促进作用，还能减弱 CRS 引起的肿瘤组织中 STAT3 磷酸化水平的升高。此外，XCHT 能抑制 IL-6 诱导的 JAK2 和 STAT3 磷酸化，并且当与 AG490 和托珠单抗（TCZ）联合使用时，几乎不再能减弱 JAK2 和 STAT3 的磷酸化，这说明 XCHT 可阻断慢性应激激活的 IL-6/JAK2/STAT3 信号通路。
- 慢性应激通过 JAK2/STAT3 通路增强糖酵解：研究发现，XCHT 可消除 CRS 对葡萄糖摄取和乳酸产生的促进作用，增加 ATP 水平，降低糖酵解和糖酵解能力。CRS 诱导糖酵解相关酶（如 GLUT1、HK2 和 PFKP）的表达上调，XCHT 可显著逆转这种上调。当用 AG490 和托珠单抗处理细胞时，糖酵解相关酶的表达水平降低，XCHT 处理可略微增强这种抑制作用。这表明 XCHT 可通过 JAK2/STAT3 通路减轻 CRS 对 CRC 细胞糖酵解的促进作用。
研究结论和讨论部分表明，慢性应激可通过激活 IL-6 介导的 JAK2/STAT3 通路，增强糖酵解并调节免疫反应，从而促进 CRC 的进展。而 XCHT 则可通过调节糖酵解和炎症反应，抑制慢性应激诱导的 CRC 进展。这项研究不仅揭示了慢性心理应激对 CRC 的作用机制，还突出了 XCHT 在缓解 CRC 患者慢性心理应激方面的巨大潜力，为 CRC 的治疗提供了新的方向和策略。但研究也存在一些局限性，如物种差异对结果的影响、有效剂量和安全性等问题，未来还需要进一步开展临床试验进行验证。
