编辑推荐：
在肿瘤免疫治疗领域，B7H3 作为免疫检查点分子，其关键糖基化位点作用不明。中山大学肿瘤防治中心研究人员开展针对 B7H3 糖基化的研究，明确 N91/309 和 N104/322 位点关键作用，开发 Ab-82 抗体，为肿瘤免疫治疗提供新策略。
肿瘤免疫治疗一直是医学领域的热门研究方向，免疫检查点分子在肿瘤的发生、发展过程中扮演着关键角色。B7H3（B7 homolog 3 protein，又称 CD276）作为一种重要的免疫检查点分子，属于 B7 免疫球蛋白超家族，是高度 N - 糖基化的膜蛋白。它在多种实体癌中广泛高表达，却在正常组织中低表达，对肿瘤细胞的迁移、增殖、侵袭和血管生成起着重要作用，还能帮助癌细胞逃避机体的免疫监视。然而，一直以来，B7H3 蛋白发挥功能所依赖的关键糖基化天冬酰胺残基并不明确，这就像在黑暗中摸索前进，阻碍了针对 B7H3 的精准治疗策略的开发。为了打破这一困境，中山大学肿瘤防治中心的研究人员开展了深入研究，其成果发表在《Nature Communications》上。
研究人员采用了多种关键技术方法。利用 CRISPR-Cas9 技术构建 B7H3 缺陷细胞模型及敲除相关基因；通过免疫沉淀质谱（IP-MS）分析、共免疫沉淀（co-IP）实验检测蛋白间相互作用；运用定量实时 PCR（qRT-PCR）检测基因表达水平；借助流式细胞术分析细胞表面分子表达、细胞增殖及活化情况；使用免疫印迹和免疫组化染色观察蛋白表达和定位。
研究结果如下：
- 关键 N - 糖基化位点的鉴定：研究人员构建一系列 B7H3 突变体，在多种细胞系中研究发现，N91/N309 和 N104/N322 位点的 N - 糖基化对 B7H3 在细胞表面的定位和蛋白稳定性至关重要。当这些位点无法进行 N - 糖基化时，B7H3 细胞表面定位显著降低，且蛋白降解速度加快12。
- 对 B7H3 转运及降解途径的影响：通过免疫荧光染色等实验发现，N91/302 和 N104/322 位点的 N - 糖基化可触发 B7H3 从内质网（ER）到高尔基体的转运。若这些位点突变，B7H3 会在 ER 积累，进而通过内质网相关蛋白降解（ERAD）途径被降解，且该过程与 HRD1 和 SEL1L 等蛋白密切相关34。
- 对 T 细胞功能的影响：体外实验中，与表达 N91/104/309/322Q 或 8NQ B7H3 的肿瘤细胞共培养的 T 细胞，增殖和活化水平更高；体内实验表明，N - 糖基化的 B7H3 可抑制抗肿瘤 T 细胞反应，高表达 B7H3 mRNA 的肿瘤患者总体生存率较差56。
- 糖基化特异性 B7H3 抗体 Ab-82 的开发及作用机制：研究人员制备出优先识别 N91/302/N104/322 糖基化 B7H3 的单克隆抗体 Ab-82。在动物模型中，Ab-82 能有效抑制肿瘤生长，且安全性良好。其作用机制是通过诱导 B7H3 内化和降解，引发局部免疫反应，招募细胞毒性 T 细胞78。
研究结论和讨论部分表明，该研究揭示了 B7H3 上 N - 糖基化的重要生物学功能和生理作用，N91/309 和 N104/322 位点对 B7H3 的正确转运、结构稳定及抑制 T 细胞功能至关重要。开发的 Ab-82 抗体为肿瘤免疫治疗提供了新方向，有望成为一种安全有效的治疗手段。同时，对 B7H3 关键 N - 糖基化位点的鉴定，为开发靶向 B7H3 的阻断抗体及寻找其受体提供了指导，推动了肿瘤免疫治疗领域的发展。
