《Mycopathologia》：Keep the Hospital Clean: Diagnostic Performance of Ten Different Molecular and Culture-Based Methods to Detect Candidozyma (Candida) auris
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为解决如何有效检测耳道假丝酵母菌（Candidozyma auris ，曾用名Candida auris）的问题，研究人员开展了对比不同基于培养和分子检测方法的研究。结果显示两种方法都敏感，但受多种因素影响。该研究为选择合适诊断方法提供依据，助力防控该菌传播。
近年来，一种被称为 “超级真菌” 的耳道假丝酵母菌（
Candidozyma auris ，曾用名
Candida auris）在全球范围内悄然兴起，引发了医学界的高度关注。它可不是一般的酵母菌，作为一种潜在的多重耐药人类致病酵母，主要在重症患者或有基础疾病的免疫功能低下人群中 “兴风作浪”，导致医院内感染频发。由于它对多种抗真菌药物有耐药性，而且能在患者和医疗设备表面长时间定植，即使使用常规消毒剂也难以彻底清除，极易在医院环境中传播，这给医疗保健工作带来了巨大挑战。为了有效防控这种 “超级真菌”，及时准确的检测至关重要。但现有的检测方法众多，各有优劣，究竟哪种方法更适合不同的临床场景呢？这成为了亟待解决的问题。
来自荷兰阿姆斯特丹大学医学中心、韦斯特迪克真菌生物多样性研究所等机构的研究人员，针对这一难题展开了深入研究。他们通过对比十种不同的基于培养和分子的检测方法，试图找到一种高效、准确的检测策略，为临床诊断提供有力支持。这项研究成果发表在了《Mycopathologia》杂志上。
研究人员在开展研究时，主要运用了以下几种关键技术方法：首先是样本处理技术，他们选取了 ICU 患者和血液系统恶性肿瘤患者的直肠拭子样本，通过细胞计数器对样本进行标准化处理，向样本中添加不同浓度的耳道假丝酵母菌以及其他念珠菌，模拟感染和定植情况；其次是培养技术，使用 CHROMagar Candida（CC）和 CHROMagar Candida Plus（CCP）平板在 37℃和 42℃下对样本进行培养，并使用 10% NaCl Dulcitol 富集肉汤进行培养；最后是分子检测技术，利用七种不同的 qPCR 检测方法对直接样本和培养一天后的肉汤样本进行检测 。
下面来看看具体的研究结果：
- 培养分析：在仅添加耳道假丝酵母菌的样本中，CC 和 CCP 平板在 48 小时孵育后，可见生长的样本分别占 81% 和 83%，100 CFU 浓度的样本在 37℃和 42℃下均能生长。当样本中同时添加其他念珠菌时，37℃下 CC 和 CCP 平板上疑似耳道假丝酵母菌菌落的生长率分别为 94% 和 100%，但因与其他菌株相似，视觉鉴定困难。42℃时，仅耳道假丝酵母菌、白色念珠菌（Candida albicans ）和库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii ，曾用名Candida krusei）生长，利于视觉鉴定，但部分混合样本在 42℃下不生长。此外，所有接种的 dulcitol 肉汤在四天内均无可见生长。
- 分子分析：对直接样本和肉汤样本进行分子分析后发现，表现最佳的 qPCR 检测方法是 Leonhard 等人开发的内部 qPCR 和商业的 AltoStar（Altona），灵敏度和特异性均达到 100%。而 Leach 等人开发的 qPCR 出现了两个假阳性结果，PathoNostics 的 qPCR 检测灵敏度最低，在耳道假丝酵母菌载量≤50 CFU/50 μl 的样本中有七个假阴性结果。所有分子检测均显示，随着耳道假丝酵母菌浓度的增加，检测到的 Ct 值越低。
在研究结论和讨论部分，研究人员指出，基于 qPCR 的检测方法和基于培养的检测方法对诊断耳道假丝酵母菌都具有一定的敏感性。其中，Leonhard 等人开发的 qPCR 是检测低接种量样本中耳道假丝酵母菌最可靠的筛查方法；使用 CC 和 CCP 平板培养时，100 CFU/ml 的接种量可获得较高灵敏度，若要提高特异性，则需要使用 CCP 琼脂和 / 或在较高温度下培养。然而，该研究也存在一些局限性，如未纳入其他类型的临床样本、未在临床环境中进行验证、未评估操作人员间的重复性等。尽管如此，这项研究仍为临床选择合适的检测方法提供了重要参考。未来，还需要进一步研究 qPCR 与 37℃和 42℃培养相结合的检测策略，评估仅 qPCR 阳性患者的传播风险，以更好地防控耳道假丝酵母菌的传播，保障患者的健康安全。
