黄连解毒汤通过抑制 Trem2/Dap12 信号通路改善阿尔茨海默病小鼠认知障碍：开拓 AD 治疗新方向

《Chinese Medicine》：Huang-Lian-Jie-Du decoction alleviates cognitive deficits in Alzheimer’s disease model 5xFAD mice by inhibiting Trem2/Dap12 signaling pathway

为探究黄连解毒汤（HLJD）对阿尔茨海默病（AD）的治疗作用及机制，研究人员以 5xFAD 小鼠为模型开展研究。结果显示，HLJD 可改善小鼠认知障碍，抑制 Trem2/Dap12 信号通路。为深入探究 HLJD 对 AD 的治疗作用及机制，广州中医药大学第二附属医院等机构的研究人员开展了一系列研究。研究成果发表在《Chinese Medicine》杂志上。 。

　　

在人口老龄化加剧的当下，阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的防治已成为全球关注的重大健康难题。AD 是一种渐进性神经退行性疾病，主要影响老年人，以认知功能障碍、学习和记忆能力受损为主要特征，其发病与遗传、环境等多种因素相关。目前，全球 AD 患者数量持续上升，预计到 2050 年将达到 1.52 亿。尽管现有药物如乙酰胆碱酯酶抑制剂和 N - 甲基 - D - 天冬氨酸受体拮抗剂在部分临床患者中能缓解症状，但无法治愈 AD，因此迫切需要探索新的治疗策略。

中医理论认为，AD 中晚期的发病机制与 “火盛”“毒盛” 相关。黄连解毒汤（Huang - Lian - Jie - Du decoction，HLJD）作为中医经典的清热解毒方剂，由黄连、黄芩、黄柏和栀子按 3:2:2:3 的比例组成，在临床实践中对晚期 AD 显示出一定疗效。然而，其治疗 AD 的具体分子机制尚不清楚。

为深入探究 HLJD 对 AD 的治疗作用及机制，广州中医药大学第二附属医院等机构的研究人员开展了一系列研究。研究成果发表在《Chinese Medicine》杂志上。

研究人员采用了多种关键技术方法。首先，选用 5xFAD 小鼠（一种常用的 AD 动物模型，通过过表达含有五个家族性 AD 相关突变的 APP 和 PSEN1 基因构建而成）和野生型 C57BL/6J 小鼠，将 5xFAD 小鼠分为三组，分别给予低剂量（2g/kg）、高剂量（4g/kg）的 HLJD 和生理盐水处理，野生型小鼠给予生理盐水作为正常对照组。其次，运用网络药理学分析方法，预测 HLJD 治疗 AD 的潜在靶点和通路。此外，通过 Morris 水迷宫实验（MWM，一种评估小鼠学习和记忆能力的经典实验方法）、免疫荧光（IF）、硫代黄素 S（ThS）染色、定量实时聚合酶链反应（qPCR）、蛋白质免疫印迹（Western blot）和酶联免疫吸附测定（ELISA）等实验技术，对相关指标进行检测和分析。

研究结果如下：

1. HLJD 改善 5xFAD 小鼠认知障碍：MWM 实验结果表明，在学习阶段（第 2 - 5 天），5xFAD - V 小鼠（给予生理盐水的 5xFAD 小鼠）的逃避潜伏期显著长于 NC - V 小鼠（给予生理盐水的野生型小鼠），而高剂量 HLJD 治疗可显著缩短 5xFAD 小鼠的逃避潜伏期，表明其学习能力得到改善；在测试阶段（第 6 天），5xFAD - V 小鼠的逃避潜伏期明显延长，到达平台的时间显著增加，在目标象限停留的时间显著减少，显示出空间记忆能力受损，而 HLJD 治疗可显著逆转这些变化，有效改善 5xFAD 小鼠的学习和记忆能力。

2. HLJD 减少淀粉样斑块沉积和总 tau 蛋白表达：ELISA、ThS 染色和 IF 染色结果显示，5xFAD - V 小鼠海马区（HIP）的 Aβ₄₂水平和淀粉样斑块沉积显著高于 NC - V 小鼠，而 HLJD 治疗可显著降低 Aβ₄₂水平，减少淀粉样斑块沉积；同时，5xFAD - V 小鼠 HIP 的总 tau 蛋白水平也显著高于 NC - V 小鼠，HLJD 治疗可使总 tau 蛋白水平显著降低，表明 HLJD 可减少 5xFAD 小鼠 HIP 的淀粉样斑块沉积和总 tau 蛋白表达。

3. 网络药理学分析揭示潜在机制：通过网络药理学分析，研究人员从 HLJD 的活性成分中筛选出 13 种潜在活性成分，预测出 363 个潜在靶点，从 GeneCards 和 OMIM 数据库中获取 3527 个 AD 相关靶点，经分析得到 230 个重叠靶点。进一步的蛋白质 - 蛋白质相互作用（PPI）富集分析、基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析表明，HLJD 可能通过影响凋亡、酪氨酸激酶信号通路、破骨细胞分化、抗原加工和呈递等通路，以及 DAP12 信号通路等炎症相关信号通路，发挥治疗 AD 的作用。

4. HLJD 减轻 5xFAD 小鼠 HIP 的神经炎症：qPCR、ELISA 和 IF 实验结果显示，5xFAD - V 小鼠 HIP 的炎症细胞因子 TNF - α、IL - 1β 和 IL - 6 的 mRNA 和蛋白水平显著高于 NC - V 小鼠，而 HLJD 干预可显著降低这些炎症因子的水平，表明 HLJD 可抑制 5xFAD 小鼠 HIP 的神经炎症。

5. HLJD 抑制 5xFAD 小鼠 HIP 的小胶质细胞激活：Iba1 染色结果显示，5xFAD - V 小鼠 HIP 的小胶质细胞聚集增加，细胞体积增大，总过程长度减少，分支点数量减少，而 HLJD 治疗可显著抑制这些形态学改变；同时，5xFAD - V 小鼠 HIP 的 CD169（一种活跃神经炎症的标志物）阳性表达和 Iba1 与 CD169 的共定位增加，HLJD 治疗后显著降低，表明 HLJD 可抑制 5xFAD 小鼠 HIP 的小胶质细胞激活。此外，qPCR 检测小胶质细胞极化标记物发现，HLJD 可抑制小胶质细胞向促炎 M1 亚型极化，但对向抗炎 M2 亚型极化的促进作用不明显。

6. HLJD 抑制 5xFAD 小鼠 HIP 和原代小胶质细胞的 Trem2/Dap12 信号通路：qPCR、Western blot 和 IF 实验结果显示，5xFAD - V 小鼠 HIP 的 Trem2、Dap12、Csf1 和 Csf1r 的 mRNA 和蛋白水平显著高于 NC - V 小鼠，HLJD 治疗可显著抑制 Trem2、Dap12 和 Csf1 的表达；在原代小胶质细胞实验中，HLJD 处理也可显著抑制 IL - 1β、Trem2 和 Dap12 的表达，表明 HLJD 可抑制 Trem2/Dap12 信号通路，减轻小胶质细胞炎症。

研究结论和讨论部分指出，本研究表明 10 月龄 5xFAD 小鼠存在显著认知障碍，伴有 Aβ、tau 蛋白沉积和 HIP 小胶质细胞激活。HLJD 可通过抑制 Trem2/Dap12 信号通路相关的小胶质细胞神经炎症，有效改善 5xFAD 小鼠的认知障碍，为 AD 的治疗提供了新的潜在药物和治疗靶点。然而，目前 AD 的发病机制仍不完全清楚，未来还需进一步研究 HLJD 活性成分的具体作用机制，以及其与临床批准的抗 AD 药物的协同作用，为 AD 的治疗提供更有效的策略。这项研究为 AD 的治疗开辟了新方向，具有重要的理论和临床意义，有望为 AD 患者带来新的希望。