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为解决埃塞俄比亚西南部牛出血性败血症(HS)相关问题,研究人员开展了对多杀性巴氏杆菌(P. multocida)循环荚膜血清型鉴定及药敏评估的研究。结果发现血清型 B 和 E 是主要病因,且分离株存在多药耐药。该研究为 HS 防治提供重要依据。
牛出血性败血症(Hemorrhagic septicemia,HS)是一种严重危害牛群健康的急性致命性疾病,在非洲和亚洲的流行导致了大量牛死亡,造成了巨大的经济损失。目前,关于非洲地区尤其是埃塞俄比亚 HS 的研究存在诸多不足,如对多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,P. multocida)血清型的研究不够深入,疫苗株与田间菌株的关联不明确,疫苗的分布和优势血清型尚未确定等。为了解决这些问题,来自埃塞俄比亚吉吉加大学兽医学院、国家兽医研究所等机构的研究人员开展了相关研究。该研究成果发表在《BMC Microbiology》上。
研究人员采用了多种关键技术方法。首先是样本采集,从埃塞俄比亚西南部 Bench Sheko 和 Keffa 地区的 4 个选定区域,采集了 45 头疑似 HS 病牛的鼻咽拭子样本。接着进行细菌分离和鉴定,运用标准的细菌学程序从样本中分离出 P. multocida,并通过生化试验进一步确认。然后进行分子鉴定,利用 PCR 技术,针对 P. multocida 的 KMT1 基因以及血清型 B 和 E 的特定基因进行扩增,以确定菌株的种类和血清型。最后进行药敏试验,采用纸片扩散法对分离出的 P. multocida 进行 12 种抗生素的药敏测试。
研究结果如下:
- 临床调查:45 头病牛表现出高热、大量流涎、精神萎靡、浆液性鼻液、下颌下水肿等典型 HS 症状。
- 细菌分离与鉴定:在 45 份鼻咽拭子样本中,共分离出 12 株(26.7%)P. multocida。这些分离株在血琼脂上呈现非溶血、灰白色、中等大小圆形和粘液状菌落,在麦康凯琼脂上生长出小到中等大小、圆形、淡色或无色不透明菌落,革兰氏染色为阴性,呈球杆菌状。生化试验表明,分离株氧化酶、过氧化氢酶和吲哚试验均为阳性,而 Voges-Proskauer(VP)、甲基红(MR)和脲酶试验为阴性,不能发酵乳糖、麦芽糖、海藻糖和阿拉伯糖123。
- PCR 检测:所有 12 株疑似分离株经 PCR 检测,均证实为 P. multocida,扩增条带大小为 460bp。进一步的荚膜分型显示,5 株(41.7%)为血清型 B,5 株(41.7%)为血清型 E,2 株(16.7%)出现非特异性条带45。
- 药敏试验:所有 P. multocida 分离株对庆大霉素(100%)和氯霉素(100%)敏感,对土霉素(91.7%)和链霉素(75%)也有较高敏感性。然而,所有分离株对氨苄西林、克林霉素、青霉素 - G 和万古霉素均表现出多药耐药(100%),对红霉素(66.7%)和卡那霉素(50%)表现出中度耐药6。
研究结论和讨论部分指出,该研究首次在埃塞俄比亚牛群中鉴定出血清型 E 为 HS 的病因之一,同时确认了血清型 B 与国家兽医研究所(NVI)疫苗参考血清型的一致性。分离株对不同抗菌药物表现出不同的敏感性,提示在治疗 HS 时应合理选择抗生素。此外,研究发现不同地区、年龄和性别的牛感染 P. multocida 的情况存在差异,这可能与牛的饲养环境、疫苗接种情况以及免疫力等因素有关。该研究为进一步研究 HS 在不同地区的流行情况、评估现有疫苗的效果以及选择合适的治疗药物提供了重要依据,对埃塞俄比亚乃至其他地区的 HS 防控具有重要的指导意义。