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为解决结直肠癌（CRC）治疗中癌症干细胞耐药和免疫逃逸的问题，研究人员开展了益宫散（YGS）抑制 CRC 细胞恶性表型和免疫逃逸机制的研究。结果发现 YGS 和戈米辛 B 可抑制 CRC 干细胞增殖、迁移和侵袭，促进凋亡，其机制与靶向 TLR4/NF-κB 通路有关，为中药复方治疗 CRC 提供了药理依据。
研究背景：结直肠癌（Colorectal cancer，CRC）是全球常见的消化系统恶性肿瘤，每年新发病例约 190 万，发病率和死亡率呈上升趋势。目前 CRC 的治疗手段，如手术、放化疗和药物治疗，都存在局限性，像不良反应明显或对转移性 CRC 疗效有限。传统中药益宫散（Yigong San，YGS）在改善 CRC 临床不良反应方面有潜力，但它的核心活性成分和作用机制却不清楚。免疫细胞和组织细胞产生的炎症因子在机体免疫反应中至关重要，其中白细胞介素 - 6（IL-6）、白细胞介素 - 8（IL-8）、白细胞介素 - 17（IL-17）等与 CRC 关系密切，肿瘤坏死因子 -α（TNF-α）也在肿瘤发展中发挥关键作用。上皮 - 间质转化（Epithelial - mesenchymal transition，EMT）过程对癌细胞侵袭和 CRC 进展意义重大，了解 YGS 在 CRC 中对 EMT 变化的机制，有助于 CRC 的靶向治疗。网络药理学与传统中药结合，为深入研究中药复方的作用机制提供了新思路，基于此，研究人员开展了此次研究。
研究机构及研究内容：重庆市中医院的研究人员为了揭示 YGS 和戈米辛 B 抑制 CRC 细胞恶性表型和免疫逃逸的分子机制，进行了一系列实验。研究结果发表在《Hereditas》杂志上。
研究人员主要运用了以下关键技术方法：整合癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）数据库与网络药理学分析筛选关键靶点和通路；构建体外 CRC 干细胞模型和小鼠异种移植瘤模型；采用 CCK-8、Transwell、流式细胞术、qPCR/WB 等技术检测细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡、EMT 及相关蛋白和基因表达；通过 ELISA 检测炎症因子浓度；运用 TUNEL 染色、免疫组化、免疫荧光等技术分析肿瘤组织相关指标。
研究结果：
- YGS 对 CRC 干细胞转移复发的影响：成功从 SW480 细胞中分离出 CRC 干细胞，通过 WB 检测 ALDH、SOX-2 和 LGR5 蛋白含量得以证实。CCK-8 实验表明，YGS 浓度增加，对 CRC 干细胞增殖的抑制作用增强；Transwell 实验显示，细胞迁移和侵袭能力减弱；流式细胞术检测发现，细胞凋亡增加，细胞活力下降；ELISA 检测结果显示，血清中 TNF-α、IL-8 和 IL-1β 水平降低。
- CRC 关键基因筛选：基于 TCGA 数据库筛选出 13693 个 CRC 相关差异基因，通过 WGCNA 分析，将差异基因聚类成不同模块。对正、负相关模块差异基因进行 GO 和 KEGG 富集分析，筛选出相关生物过程和信号通路。并通过 String 数据库构建 PPI 网络，筛选出关键基因。
- 网络药理学筛选 YGS 影响 CRC 干细胞转移复发的候选单体、靶基因和通路：从 TCMSP 数据库获得 659 个 YGS 靶点，与 CRC 差异靶点交叉比对得到 100 个重叠靶点。构建相关网络，筛选出关键基因，进行生存分析、GO 和 KEGG 分析，确定 YGS 影响 CRC 的候选单体为戈米辛 B，靶基因是 TLR4，作用通路为 NF-κB 信号通路。
- 体外模型验证：CCK-8、划痕实验、Transwell 侵袭实验、流式细胞术、ELISA、qPCR 和 WB 等实验表明，YGS 和戈米辛 B 可抑制 CRC 干细胞增殖、迁移和侵袭，促进凋亡，降低细胞内炎症因子浓度和 NF-κB 通路蛋白水平，而 TLR4 过表达可抵消这些作用。
- 体内模型验证：构建小鼠异种移植瘤模型，结果显示 YGS 联合顺铂、戈米辛 B 联合顺铂可抑制肿瘤生长，促进肿瘤组织凋亡，降低炎症因子水平，减少肿瘤组织中 TLR4、p-IKKα/β 和 p-IκBα 蛋白表达，抑制 EMT 过程。
研究结论与讨论：YGS 在不同浓度下对 CRC 细胞的增殖、迁移和侵袭有抑制作用，还能促进细胞凋亡、抑制炎症因子表达。通过数据库分析和实验验证，确定了 YGS 的候选成分戈米辛 B，作用靶基因 TLR4 和作用通路 NF-κB。研究证实 YGS 可通过 NF-κB 通路致敏 CRC 干细胞，抑制肿瘤免疫逃逸，在组织水平抑制 CRC 的 EMT 过程。目前 CRC 的治疗面临耐药、副作用和免疫逃逸等挑战，YGS 与传统治疗方法联合使用，有望克服单一治疗的局限性，提高 CRC 的治疗效果，但还需进一步研究验证其临床应用潜力。这项研究为中药复方治疗 CRC 提供了重要的药理依据，为后续的临床研究和药物开发奠定了基础 。
