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为探究循环肿瘤细胞（CTCs）与晚期胆囊腺癌（aGA）患者的关系，中南大学湘雅二医院研究人员开展了相关研究。结果显示，预处理时 CTCs 阳性与 aGA 患者预后不良密切相关，监测 CTCs 亚型和表型有助于评估肿瘤治疗反应，为个性化治疗提供依据。
胆囊癌，作为胆道系统中最为常见的恶性肿瘤，其中胆囊腺癌又是其主要的病理类型，在消化道恶性肿瘤中也占据着相当的比重。早期诊断并进行根治性切除，是改善患者长期生存的有效手段。然而，现实却很残酷，胆囊癌早期症状隐匿且不典型，多数患者确诊时已处于晚期，只有少数人能获得手术切除的机会，预后极差，患者的中位生存时间短，5 年生存率也很低，大多患者最终都因肿瘤转移而离世。
循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cells，CTCs），自 1869 年被发现以来，就被视为肿瘤的 “液体活检” 样本。它能从外周血中被检测和捕获，在识别肿瘤性质、监测肿瘤进展与转移、评估治疗反应等方面，为临床提供了一种便捷有效的方式。外周血中 CTCs 的计数，已被证实是肿瘤患者独立的预后指标。但由于 CTCs 数量极少，还与大量其他血细胞混合存在，检测和计数面临着极大的技术挑战。
目前，关于 CTCs 亚型和表型特征及其临床应用的研究数据有限。为了深入探究这些问题，中南大学湘雅二医院的研究人员开展了一项回顾性研究。他们旨在研究预处理时 CTCs 计数与临床病理参数及预后的关系，以及化疗和免疫治疗期间 CTCs 的动态变化、分类与肿瘤治疗反应的相关性。
研究人员从 2018 年 1 月至 2023 年 1 月，选取了经组织学确诊的晚期胆囊腺癌患者，这些患者的东部肿瘤协作组体能状态评分（ECOG - PS）≤1，且按照第 8 版美国癌症联合委员会（AJCC）胆囊癌指南接受了标准治疗。研究排除了有其他恶性肿瘤病史、处于妊娠或哺乳期、无法获得随访数据的患者。
在研究过程中，研究人员使用了 CanPatrol? 技术来检测 CTCs。该技术先对 5mL 外周血样本进行纳米膜过滤富集，然后通过基于分支 DNA（bDNA）信号放大的多重 RNA 原位杂交（RNA - ISH）检测，对 CTCs 进行计数和分类。同时，研究人员还检测了肿瘤组织中程序性死亡配体 - 1（Programmed Cell Death Ligand - 1，PD - L1）的表达和微卫星不稳定性（Microsatellite Instability，MSI）状态，记录了患者的临床数据并进行随访。统计分析采用 SPSS 27 软件，通过多种检验方法，计算总生存期（Overall Survival，OS）和无进展生存期（Progression - Free Survival，PFS）等指标。
研究结果如下：
- 研究人群特征：最初评估了 45 例患者，9 例被排除，最终 36 例患者纳入研究。根据预处理时 CTCs 检测结果，27 例（75.00%）为 CTCs 阳性组，9 例为 CTCs 阴性组。两组患者在年龄、性别、胆囊结石方面无显著差异，但在 Ca199 水平、肿瘤分化程度、淋巴浸润、血管浸润、远处转移和 TNM 分期等方面存在显著差异。
- CTCs 检测及相关性：预处理时 CTCs 总体阳性率为 75.00%，CTCs 阳性率和计数与 Ca199 水平、肿瘤分化程度、淋巴浸润、血管浸润、远处转移显著相关。CTCs 阳性组患者的 OS（HR 0.335，95% CI 0.165 - 0.678，P = 0.0023）和 PFS（HR 0.364，95% CI 0.179 - 0.739，P = 0.0024）显著短于 CTCs 阴性组。
- CTCs 动态变化及相关性：治疗后 1 个月和 3 个月，CTCs 计数有所变化，但与治疗前相比，差异无统计学意义。在化疗过程中，间充质 CTCs 计数在疾病进展时会快速增加；在免疫治疗中，即使肿瘤组织中 PD - L1 阴性，若 CTCs 中 PD - L1 阳性，MSI - H 的 aGA 患者仍可能有良好的免疫反应。
- 单因素和多因素分析：单因素分析显示，预处理时 CTCs 阳性、Ca199≥200kU/L、CEA≥5mg/mL、总胆红素 > 50umol/L、有远处转移、未接受化疗和未接受免疫治疗是 aGA 患者 OS 不良的预测因素。多因素分析表明，预处理时 CTCs 阳性、远处转移、未接受化疗和未接受免疫治疗与预后不良密切相关。
研究结论和讨论部分指出，预处理时 CTCs 阳性与 aGA 患者预后不良密切相关。间充质 CTCs 计数与化疗反应显著相关，CTCs 的免疫表型与免疫治疗反应密切相关。这意味着 CTCs 检测可对 aGA 患者进行无创、连续的动态监测，为未来个性化治疗和疗效评估提供了潜在的方向。不过，该研究也存在样本量小和随机性受限的问题，未来需要多中心、大样本的前瞻性随机试验进一步验证。该研究成果发表在《BMC Cancer》上，为胆囊腺癌的诊疗研究提供了重要的参考依据。
研究人员在本研究中主要运用了以下关键技术方法：一是采用 CanPatrol? 技术检测 CTCs，该技术基于纳米膜过滤富集和多重 RNA 原位杂交，能对 CTCs 进行计数和分类；二是通过免疫组化（IHC）检测肿瘤组织中 PD - L1 和 MLH1 的表达；三是利用免疫荧光（IFC）检测 CTCs 中 PD - L1 的表达；四是对符合条件的患者进行临床数据收集和随访，构建样本队列进行分析。
