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免疫抑制会引发多种疾病，现有免疫增强剂存在副作用。为寻找天然免疫增强剂，研究人员对刺五加叶多糖（ASPS-A1）展开研究。结果发现 ASPS-A1 能激活 RAW 264.7 细胞，通过多条信号通路调节免疫。这为其开发成免疫增强剂提供了理论依据。
在人体的防御体系中，免疫系统堪称 “忠诚卫士”，时刻守护着我们的健康。然而，免疫抑制这个 “捣乱分子” 却常常来破坏，它会引发感染、癌症等一系列疾病。目前常用的免疫增强剂，如左旋咪唑和干扰素，虽然能发挥一定作用，但却伴有恶心、发热等副作用，就像带着 “小尾巴” 一样，给患者带来额外的困扰。因此，寻找一种既有效又安全、副作用少的天然免疫增强剂，成为了科研领域的热门研究方向。
在这样的背景下，长春大学等机构的研究人员积极投身于相关研究。他们把目光聚焦在刺五加（Acanthopanax senticosus）这种东北特有的野生资源上。刺五加含有多种活性成分，其中多糖的免疫调节作用尤为突出。研究人员深入挖掘刺五加叶多糖的潜力，开展了一系列研究。最终发现，从刺五加叶中提取的纯化多糖成分 ASPS-A1 具有显著的免疫调节活性，这一成果发表在《Scientific Reports》上，为天然免疫增强剂的开发提供了新的思路和理论依据，意义重大。
研究人员在研究过程中运用了多种关键技术方法。首先是柱色谱技术，利用该技术分离出具有免疫调节活性的多糖成分 ASPS-A1。然后，通过高效液相凝胶渗透色谱（HPGPC）、傅里叶变换红外光谱（FT-IR）等技术对其结构和性质进行表征。此外，还借助实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）、RNA 测序（RNA-seq）等技术研究其免疫调节机制，并使用分子对接技术探索其作用靶点。
下面来看具体的研究结果：
- 多糖制备与活性成分筛选：研究人员采用超声辅助水提取法得到刺五加叶粗多糖（ASPS），再经 DEAE-52 纤维素柱和 Superdex-G100 凝胶柱分离纯化，得到多个组分。通过比较各组分对 RAW 264.7 细胞中细胞因子表达水平的影响，发现 ASPS-A1 上调细胞因子的能力最强，是一种有潜力的免疫增强剂。
- 多糖结构表征：运用 HPGPC 测定 ASPS-A1 的分子量为 147.8kDa，其单糖组成主要包括 Gal（30.1%）、GalA（24.5%）、Ara（16.9%）等。红外光谱分析显示其具有多糖的特征吸收峰，且含有酯化多糖成分。扫描电子显微镜（SEM）观察发现其呈棒状结构。酶解实验表明，ASPS-A1 主要由 α-1,4-D-GalA、α-1,5-L-Ara 和 β-1,4-D-Gal 残基组成，且具有部分酯化结构，同时含有 HG 型和 RG-I 型果胶。
- 免疫活性分析：MTT 实验表明，在 50 - 800μg/mL 浓度范围内，ASPS-A1 对 RAW 264.7 细胞无明显细胞毒性，在 50 - 200μg/mL 浓度范围内还能促进细胞增殖。NO 含量测定和细胞因子表达检测结果显示，ASPS-A1 能显著促进 RAW 264.7 细胞释放 NO，增强 iNOS、TNF-α、IL-1β 和 IL-6 等细胞因子的分泌，且呈剂量依赖性，表明其具有较强的免疫调节活性。
- RNA-seq 分析：对 RAW 264.7 细胞进行 RNA-seq 分析，发现 ASPS-A1 处理后有 1234 个基因显著差异表达，其中 923 个基因上调，311 个基因下调。基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析表明，这些差异表达基因主要参与 RNA 聚合酶 II 介导的转录和翻译、蛋白质结合等功能，以及 NF-κB、Toll 样受体（TLR）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等与免疫功能密切相关的信号通路。
- 关键基因的 RT-qPCR 验证：通过 RT-qPCR 检测 Fcgr3、Ccl4 等关键基因的表达水平，结果与转录组数据一致，证明了转录组数据的可靠性。
- MAPK 信号通路的激活：Western blot 分析显示，ASPS-A1 能显著提高 RAW 264.7 细胞中 p-ERK1/2、p-p38 和 p-JNK 的磷酸化水平，且在 200μg/mL 浓度时达到最高，表明 ASPS-A1 通过激活 MAPK 信号通路增强免疫功能。
- NF-κB 信号通路的激活：同样通过 Western blot 检测发现，随着 ASPS-A1 浓度增加，细胞核中 p-p65 与 p65 的比值以及 p-IκB-α/IκB-α 的比值均显著增加，表明 ASPS-A1 能显著激活 RAW 264.7 细胞中的 NF-κB 信号通路。
- Toll 信号通路的激活：使用 TLR2 和 TLR4 的特异性抑制剂进行实验，结果表明 ASPS-A1 可通过 TLR4 受体激活巨噬细胞，促进 iNOS、TNF-α 和 IL-6 的分泌；通过 TLR2 受体诱导巨噬细胞分泌 TNF-α 和 IL-1β。分子对接实验进一步证实，ASPS-A1 的主要单糖成分 Gal、GalA 和 Ara 能与 TLR2 和 TLR4 结合，且与 TLR4 的结合能力更强。
综合研究结论和讨论部分内容，研究人员从刺五加叶中成功分离出具有免疫调节活性的多糖成分 ASPS-A1，并系统地揭示了其免疫调节机制。ASPS-A1 通过激活 TLR/MAPK/NF-κB 信号通路，显著促进 RAW 264.7 细胞分泌关键炎症介质，如 TNF-α、IL-6 和 IL-1β 等，发挥免疫调节作用。该研究不仅丰富了人们对 ASPS-A1 免疫调节功能的认识，还为其作为潜在免疫增强剂的开发和应用提供了科学依据。不过，目前的研究主要基于体外实验模型，存在一定局限性。未来可通过体内模型进一步验证 ASPS-A1 与受体的结合情况，探索其他受体在其免疫调节作用中的潜在参与机制，从而更全面地揭示多糖介导的免疫反应机制。
