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为解决心肌损伤检测问题,研究人员开展基于量子点(QDs)、超顺磁性氧化铁纳米颗粒(SPIONs)和适配体检测心肌肌钙蛋白 I(Troponin I)的研究。结果显示该传感器检测限低、稳定性好。这为心肌损伤检测提供了新方法。
在生命的长河中,心脏就像一台永不停歇的精密 “发动机”,为身体各个器官输送着至关重要的血液。一旦心脏出现问题,后果不堪设想。心肌损伤便是威胁心脏健康的一大 “杀手”,而及时、准确地检测出心肌损伤对于治疗和挽救生命至关重要。传统的心肌损伤检测方法,如实验室检测,往往需要专业的技术人员和昂贵的设备,不仅耗时费力,还可能因为各种因素导致检测结果不准确。这就好比在一场与时间赛跑的比赛中,传统方法却总是慢半拍,无法满足临床快速、准确诊断的需求。
为了攻克这一难题,来自土耳其多所高校(安卡拉科学大学、安卡拉哈奇贝拉姆维利大学、安卡拉耶尔德勒姆贝亚齐特大学)的研究人员展开了深入研究。他们致力于开发一种新型的生物传感器,以实现对心肌损伤标志物 —— 心肌肌钙蛋白 I(Troponin I)的高效检测。最终,他们成功研制出一种基于量子点(QDs) - 超顺磁性氧化铁纳米颗粒(SPIONs) - 适配体的可重复使用的开启式荧光生物传感器,这一成果发表在《Journal of Fluorescence》上,为心肌损伤的检测带来了新的曙光。
在研究过程中,研究人员主要运用了以下几种关键技术方法:
- 材料制备与修饰:通过对 CdSe/ZnS 量子点用 3 - 巯基丙酸(MPA)进行修饰,使其具有水溶性,并利用 N -(3 - 二甲基氨基丙基) - N - 乙基碳二亚胺(EDC)和 N - 羟基琥珀酰亚胺(NHS)激活羧基,将 Tro4 适配体连接到 SPION/QD 共轭物上。
- 表征技术:运用透射电子显微镜(TEM)观察材料的形态;采用动态光散射(DLS)测量纳米生物传感器及其组件的流体动力学尺寸和 zeta 电位;利用傅里叶变换红外光谱(FTIR)分析材料表面功能基团的变化;通过紫外 - 可见光谱(UV - Vis spectroscopy)研究纳米传感器的光学性质。
- 检测分析:运用荧光光谱技术,在不同波长范围内测量荧光强度,以此评估 QDs - SPION - Aptamer 共轭物与目标分子(Troponin I)的结合相互作用,同时用于检测传感器的选择性和稳定性。
下面让我们来看看具体的研究结果:
- 生物传感器的表征:
- 适配体负载量:通过测量单链 DNA(ssDNA)在 260nm 处的吸光度,发现约 70% 的初始适配体保留在纳米传感器上,表明 QDs - SPION - Aptamer 系统功能化有效。
- 尺寸与电位:分析 SPIONs、QDs、SPION + QD 和 SPION + QD + 适配体(纳米生物传感器)的流体动力学尺寸,分别为 215.8 ± 3.22nm、1929.33 ± 184nm、2531.33 ± 211.3nm 和 5540.66 ± 2011nm。zeta 电位测量显示,MPA 涂层使 CdSe/ZnS 表面带负电,适配体成功涂层后,纳米传感器的 zeta 电位从正值变为 - 32mV。
- 微观形态与结构:TEM 图像显示,MPA 涂层的 QDs 核心结构直径为 10 - 15nm,呈圆形;PEI 涂层的 SPIONs 大多呈球形。FTIR 光谱分析表明,材料表面的功能基团发生了预期的反应和变化,且制备的纳米复合结构具有水溶性,适合生物传感器应用。UV - Vis 光谱也证实了纳米生物传感器各组件的存在。
- 基于荧光的心肌肌钙蛋白 I 检测与定量:
- 荧光变化规律:随着心肌肌钙蛋白 I 浓度增加,传感器荧光强度增强。在 2 - 40ng/ml 范围内,荧光强度变化与心肌肌钙蛋白 I 浓度呈线性关系,回归方程为 (F1-F0)/F0(相对荧光强度) = 0.0156 × 心肌肌钙蛋白 I (ng/ml) + 0.2137(R2=0.9777) 。
- 检测限与定量限:通过标准偏差法计算得出,该传感器的检测限(LOD)为 13.3ng/ml,定量限(LOQ)为 40.3ng/ml。
- 荧光生物传感器选择性和稳定性的测定:
- 稳定性:对不同浓度(10ng/ml 和 40ng/ml)的心肌肌钙蛋白 I 进行检测后,将传感器组件磁分离、清洗并储存。30 天后再次检测,发现荧光强度无明显损失,表明该传感器在 30 天内具有很高的光稳定性和可重复性。
- 选择性:在存在尿酸、乳酸、葡萄糖等多种人体血液中常见的化学物质和生物分子时,该传感器对心肌肌钙蛋白 I 具有较好的选择性。尽管酸性分析物和某些物质会使传感器荧光强度淬灭,但在检测心肌肌钙蛋白 I 时,其 “开启” 机制不受影响。
研究结论和讨论部分指出,该研究成功制备了一种基于 QDs、SPIONs 和 Tro - 4 适配体的开启式生物传感器。此传感器无需预处理和复杂仪器,可重复使用,对低浓度的心肌肌钙蛋白 I 也能产生显著的荧光响应。在 2 - 40ng/ml 范围内,传感器的分析曲线对心肌肌钙蛋白 I 浓度显示出良好的线性关系。而且,在血清中存在干扰代谢物的情况下,荧光增强而非减弱,这为传感器提供了可接受的灵敏度。该纳米传感器令人满意的可重复性表明,它是检测心肌肌钙蛋白 I 的理想选择,为心肌损伤的早期诊断和临床监测提供了一种高效、便捷的新工具,有望在未来的临床实践中发挥重要作用,帮助医生更及时、准确地判断患者的心脏健康状况,为挽救生命争取宝贵的时间。