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为探究霍乱弧菌（Vibrio cholerae）对多粘菌素 B（PmB）耐药机制，研究人员开展相关研究。他们发现 ompV 与 carRS、virK 构成操纵子，该操纵子可激活多种耐药系统。此研究揭示了霍乱弧菌耐药新机制，意义重大。
在细菌与人类的 “战争” 中，抗菌肽作为人体和细菌自身用于抵御感染、竞争生存空间的 “秘密武器”，一直备受关注。多粘菌素 B（PmB）作为一种环状抗菌肽，在治疗多重耐药菌感染方面发挥着关键作用，但细菌对它的耐药问题也日益严重。霍乱弧菌（Vibrio cholerae）作为引发霍乱的 “元凶”，其耐药机制的研究至关重要。此前，虽然已经知道霍乱弧菌的一些耐药机制，如通过 almEFG 降低外膜负电荷来抵抗 PmB，但仍有许多未知之处。为了深入了解霍乱弧菌对 PmB 的耐药机制，来自加拿大蒙特利尔大学等机构的研究人员开展了一系列研究。
研究人员通过转录组分析、突变体构建、基因表达分析、蛋白结构预测等技术方法，对霍乱弧菌进行了深入研究。其中，转录组分析用于筛选在 PmB 作用下差异表达的基因；突变体构建帮助确定相关基因在耐药中的作用；基因表达分析探究基因之间的调控关系；蛋白结构预测则从分子层面揭示蛋白与 PmB 的相互作用机制。
研究结果如下：
- ompV 在 PmB 存在下上调：转录组分析表明，在 PmB 存在时，ompV 的表达显著增加，定量 RT-PCR 进一步证实其表达上调 2.92 倍。这一结果提示 ompV 可能与霍乱弧菌对 PmB 的耐药性有关。
- ompV 缺失增加细菌对抗菌肽的敏感性：构建 ompV 缺失突变体后发现，该突变体对 PmB 和 LL-37 的敏感性显著增加，最低抑菌浓度（MIC）降低。通过互补实验，恢复 ompV 表达后，细菌对 PmB 的耐药性得以恢复甚至增强，表明 ompV 参与了霍乱弧菌对抗菌肽的耐药过程。
- ompV 缺失不影响膜完整性和膜泡（MVs）相关功能：利用荧光探针实验发现，ompV 缺失并不影响细菌细胞膜的完整性。同时，研究表明 ompV 缺失对 MVs 的产生、大小和捕获 PmB 的能力均无显著影响，说明 ompV 在抗菌耐药中的作用并非通过影响膜完整性和 MVs 功能实现。
- carRS、ompV 和 virK 构成操纵子且受 PmB 调控：研究发现 carRS（vprAB）、ompV 和 virK 在基因组上紧密相连，通过 PCR 扩增和 RT-qPCR 分析证实它们构成一个操纵子，且在 PmB 存在时，该操纵子的转录水平显著增加。此外，敲除 virK 也会使细菌对 AMPs 更敏感，说明 VirK 同样参与抗菌耐药过程，且 ompV 和 virK 双突变对细菌敏感性无累加效应。
- ompV 影响抗菌耐药相关基因 vexAB 的表达：定量 RT-PCR 分析显示，在 PmB 存在下，ompV 缺失会导致 vexAB 表达无法上调，表明 ompV 在调控 vexAB 表达中起着重要作用，进而影响霍乱弧菌对 PmB 的耐药性。
- OmpV 的结构特征与功能预测：通过蛋白结构预测发现，OmpV 具有独特的 β - 桶状结构，其侧壁存在一个侧向开口，可通向带负电的口袋，该口袋能够容纳 PmB。分子对接模拟显示 PmB 与 OmpV 有较高亲和力，这表明 OmpV 可能作为 PmB 的传感器，通过与 PmB 结合引发构象变化，激活细胞内的耐药机制。
研究结论表明，ompV 是霍乱弧菌中一个新的抗菌耐药效应因子，carRS - ompV - virK 操纵子能够激活多种耐药系统，包括脂多糖（LPS）修饰系统 almEFG 和 efflux 泵 vexAB。这一发现揭示了霍乱弧菌对抗菌肽的一种新的耐药策略，为开发新型抗菌药物和治疗方法提供了重要的理论依据。同时，研究还发现 OmpV 可能通过直接结合 PmB 并激活相关信号通路来实现耐药调控，这一机制与铜绿假单胞菌中类似系统有相似之处，提示在细菌中可能存在保守的 AMP 信号传导和耐药机制。未来，进一步研究 VirK 在抗菌耐药中的具体作用，以及 CarRS 在 vexAB 调控中的详细机制，将有助于更深入地理解霍乱弧菌的耐药机制，为防控霍乱的传播提供更有效的手段。
