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锥虫病（Surra）由伊氏锥虫（Trypanosoma evansi）引起，现有诊断方法存缺陷。研究人员针对 VSG 基因设计 Tev3.100 引物，检测其特异性和敏感性。结果显示，该引物检测牛样本时敏感且特异，但与 T. equiperdum 有交叉反应。这为锥虫病诊断提供新工具。
在动物健康领域，有一种名为锥虫病（Surra）的疾病，如同隐藏在暗处的 “杀手”，对全球哺乳动物的健康造成了极大威胁。引发锥虫病的罪魁祸首是伊氏锥虫（Trypanosoma evansi），它的身影遍布全球多地，除了北美、澳大利亚和南极洲，在超过 48 个国家都能发现它作恶的踪迹。无论是温顺的家畜，像骆驼、马、牛、狗，还是众多野生哺乳动物，都难以逃脱它的侵害。感染后的动物，症状多样，常见的有发热、贫血、嗜睡和免疫抑制，严重时甚至会失去生命，这不仅让养殖户遭受巨大的经济损失，也对生态平衡产生了不良影响。
然而，诊断锥虫病并非易事。在拉丁美洲，伊氏锥虫感染常常与其他几种锥虫感染并存，使得疾病的诊断和治疗更加复杂。现有的诊断方法，尤其是分子检测手段，存在诸多不足。一些 PCR 引物虽然被认为能用于伊氏锥虫的分子诊断，但很多只是基于计算机模拟预测，在实际检测生物样本时，缺乏针对某些相关锥虫 DNA 的特异性测试。而且，这些方法无法有效识别某些伊氏锥虫分离株，还容易在其他锥虫感染时产生假阳性结果。因此，开发新的诊断方法迫在眉睫。
为了解决这些难题，巴西圣卡塔琳娜州立大学（State University of Santa Catarina - UDESC）的研究人员挺身而出，开展了一项意义重大的研究。他们将目标锁定在一种名为变异表面糖蛋白（Variant Surface Glycoprotein，VSG）的基因上，具体是 TevSTIB805.3.100 基因。此前的蛋白质组学研究发现，该基因表达的蛋白可能是潜在的伊氏锥虫诊断生物标志物，并且在血清中被检测到，这让研究人员看到了希望。于是，他们针对这个基因设计了一对引物 ——Tev3.100 引物，想要测试其对不同寄生虫基因组 DNA 以及生物样本检测的特异性和敏感性，为锥虫病的诊断寻找新的有效工具。该研究成果发表在《Acta Tropica》杂志上。
研究人员开展此项研究主要运用了以下关键技术方法：首先，从巴西南部自然感染的狗身上获取伊氏锥虫样本，为后续研究提供材料；然后，经过多次分析筛选出 Tev3.100Fw 和 Tev3.100Rv 引物；接着，利用 PCR 技术，对不同物种的基因组 DNA（gDNA）以及 71 份来自拉热阿纳克里奥尔牛的生物样本进行检测，以此评估引物的性能 。
下面来看具体的研究结果：
- 引物特异性测试：研究人员用 Tev3.100 引物对伊氏锥虫（T. evansi）、布氏锥虫（T. brucei）、马媾疫锥虫（T. equiperdum）、兰氏锥虫（T. rangeli）、克氏锥虫（T. cruzi）、活跃锥虫（T. vivax）、牛巴贝斯虫（Babesia bovis）、双芽巴贝斯虫（B. bigemina）和无形体属（Anaplasma）等物种的基因组 DNA 进行检测。结果发现，该引物能在伊氏锥虫的基因组 DNA 上扩增出一条约 1800bp 的单一条带。但令人意外的是，它与布氏锥虫、马媾疫锥虫的 DNA 发生了交叉反应，这与计算机模拟预测的结果并不一致。
- 生物样本检测：研究人员使用 Tev3.100 引物对 71 份拉热阿纳克里奥尔牛的生物样本进行检测，并与 RoTat 1.2 引物的检测结果进行对比。结果显示，Tev3.100 引物在检测这些生物样本时，展现出了较高的敏感性（98.28%）和特异性（84.62%），并且与 RoTat 引物检测结果的一致性也很高（κ: 0.854; SE: 0.082; 95 % CI: 0.695–1.000）。
综合研究结果，Tev3.100Fw/Rv 引物在巴西南部自然感染动物的锥虫病流行病学调查中，展现出了作为分子诊断工具的有效性。在检测基因组 DNA 和现场样本时，其特异性和敏感性与其他市售引物相当，甚至在某些方面更具优势，比如它能够检测到多态性。不过，Tev3.100 引物与马媾疫锥虫 DNA 的交叉反应，也为研究人员敲响了警钟。这表明，对于拉丁美洲的这些相关物种，还需要开展新的基因组研究，以进一步明确它们之间的关系，提高诊断的准确性。这项研究为锥虫病的诊断开辟了新的道路，为后续更精准的诊断方法开发提供了重要参考，有望在未来帮助人们更好地防控锥虫病，保护动物健康，减少经济和生态损失。
