四种SARS-CoV-2中和抗体检测方法的比较评估及其在疫苗免疫效果评价中的应用

研究人员针对SARS-CoV-2中和抗体(NAbs)检测标准不统一的问题，系统比较了替代病毒中和试验(SVNT)、假病毒中和试验(PVNT)、传统病毒中和试验(CVNT)和流式细胞术中和试验(IFVNT)四种方法的性能。通过对25份免疫动物血清和11株单克隆抗体(MAbs)的分析，发现PVNT和CVNT具有更低的检测限(LoD)，所有方法均能准确评估中和抗体水平，为疫苗免疫效果评价提供了重要技术参考。

　　

在全球抗击COVID-19疫情的背景下，准确评估中和抗体水平成为衡量疫苗保护效果和康复者免疫状态的关键。然而，目前缺乏对多种中和抗体检测方法的系统性比较，这给科研和临床实践带来了挑战。中和抗体(NAbs)通过靶向病毒刺突蛋白的受体结合域(RBD)，阻断SARS-CoV-2进入宿主细胞，其水平直接反映个体的免疫保护能力。

来自伊朗德黑兰医科大学等机构的研究团队在《Analytical Biochemistry》发表论文，首次对四种主流病毒中和试验(VNTs)进行了全面比较。研究采用25份免疫小鼠和兔子的血清样本，以及11株靶向RBD不同表位的单克隆抗体(MAbs)，通过替代病毒中和试验(SVNT)、假病毒中和试验(PVNT)、传统病毒中和试验(CVNT)和一步/二步流式细胞术中和试验(IFVNT)进行平行检测。

关键技术包括：1）基于竞争ELISA原理的SVNT；2）使用携带GFP/luciferase报告基因的假病毒的PVNT；3）基于活病毒抑制的CVNT；4）通过荧光信号检测中和效果的IFVNT。样本来源于免疫动物血清和已鉴定的RBD特异性MAbs。

细胞系、抗原、抗体和试剂
研究使用Huh7、Caco2等多种人源细胞系，以及ACE2转染的HEK293T细胞。重组RBD蛋白来自商业供应商，11株MAbs按表位特异性分为4组，亲和力常数0.18-1.17 nM。

RBD特异性MAbs的特征
MAbs识别RBD上非重叠表位，分为4个交叉竞争组（如1D1、4C8等），为方法比较提供了多样化的抗体样本。

讨论
研究发现四种VNTs结果高度一致，但PVNT和CVNT显示出更低检测限(LoD)。特别值得注意的是，IFVNT作为新兴技术，其操作简便性可能更适合大规模筛查。所有方法均能有效评估多克隆和单克隆中和抗体水平，为疫苗研发和临床检测提供了灵活选择。

该研究首次系统比较了四种VNTs在SARS-CoV-2中和抗体检测中的性能，证实了不同方法间的可替代性。PVNT和CVNT的高灵敏度使其成为基础研究的理想选择，而SVNT和IFVNT则更适合临床筛查。这些发现为标准化中和抗体检测提供了重要依据，对评估疫苗免疫效果和被动免疫治疗具有指导意义。研究还揭示了不同表位特异性抗体的中和效能差异，为广谱抗病毒药物设计提供了新思路。