基于低速离心分离与自引发链延伸荧光定量技术的铜绿假单胞菌检测新方法

针对医院和家庭获得性肺炎中铜绿假单胞菌（P. aeruginosa）快速检测难题，研究人员开发了一种结合适配体识别、低速离心分离与自引发链延伸信号放大的荧光定量平台。该方法实现了2.4 cfu/mL的超低检测限和六数量级的宽线性范围，兼具高选择性与操作简便性，为急诊科早期诊断和感染管理提供了新工具。

　　

论文解读

铜绿假单胞菌（P. aeruginosa）是医院和养老机构中常见的耐药性病原体，其引发的肺炎致死率高，早期诊断面临两大挑战：传统培养法耗时48-78小时，而PCR技术依赖昂贵设备且操作复杂。现有荧光适配体传感器虽能实现10³-10⁷ cfu/mL的检测，但无法同步分离细菌，且灵敏度不足。针对这一瓶颈，中国研究人员在《Analytical Biochemistry》发表的研究提出了一种创新解决方案。

研究团队采用三项核心技术：1）含F23适配体的滚环扩增（RCA）支架特异性聚集目标菌；2）低速离心（1000×g）直接分离菌体-适配体复合物；3）自引发链延伸反应（无需外源引物）触发荧光信号放大。实验使用CMCC提供的标准菌株（ATCC 15442等），通过荧光分光光度计实现快速读数。

研究结果

1. 检测原理验证：设计的环状padlock探针包含适配体转录区（3'端）和自引发序列（5'端），RCA产物形成多价结合支架，显著提升细菌捕获效率。
2. 性能分析：在10⁰-10⁶ cfu/mL范围内呈现线性响应，检测限低至2.4 cfu/mL，较同类方法提升100倍。对E. coli等常见病原体的交叉反应率<5%。
3. 临床适用性：模拟痰液样本中回收率达92.3%-106.7%，全程检测时间<3小时，且分离的菌体可直接用于药敏试验。

结论与意义
该研究首次将低速离心分离与自引发核酸扩增技术整合，突破了传统方法在灵敏度、速度和操作成本上的限制。Wu Jieping医学基金会资助的这项成果，为急诊科快速鉴别P. aeruginosa感染提供了可靠工具，尤其适用于资源有限地区。未来可通过替换适配体序列拓展至其他病原体检测，具有显著的临床转化潜力。