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中华鳖养殖规模扩大引发疾病增多问题，研究人员建立中华鳖肾细胞系（PSK）并对新型腺病毒（CSTAdV - 1）进行分子特征研究。成功建立 PSK 细胞系，确定 CSTAdV - 1 为新物种，为鳖类病毒研究奠定基础。
在中华鳖的养殖世界里，一场看不见的 “战争” 正在悄然打响。中华鳖，这种两栖且用肺呼吸的爬行动物，凭借其鲜美的味道、丰富的营养和重要的药用价值，深受人们喜爱。随着中国内地水产养殖业的迅猛发展，中华鳖的年养殖产量在 2023 年达到了 497 千吨。然而，就像打开了潘多拉魔盒，养殖规模的不断扩大和养殖方式的日益密集，让各种疾病纷纷找上门来。细菌和病毒等病原体成了中华鳖健康的 “杀手”，其中已报道的病毒就有中华鳖出血综合征病毒（TSHSV）、中华鳖虹彩病毒（STIV）、中华鳖败血症球形病毒以及中华鳖黄病毒。
在病毒的大家族中，腺病毒一直是备受关注的对象。它是一种没有包膜的病毒，有着独特的伪 T = 25 二十面体结构，基因组是线性双链 DNA 分子，两端还带有特殊的反向末端重复序列（ITRs）。虽然腺病毒在众多脊椎动物中都被发现过，但在中华鳖身上却一直未见其踪影。而且，由于缺乏合适的中华鳖细胞系，研究人员在研究中华鳖病毒性疾病时困难重重，这不仅限制了对病毒的深入了解，也阻碍了有效疫苗的研发。
为了打破这一困境，来自国内的研究人员勇敢地踏上了探索之路。他们致力于建立一种中华鳖的细胞系，并利用它来研究从患病中华鳖样本中分离出的新型腺病毒。经过不懈努力，研究取得了一系列重要成果，相关论文发表在《Aquaculture》上。这些成果对于深入了解中华鳖病毒，保护中华鳖养殖业的健康发展有着重要意义。
研究人员主要运用了以下几种关键技术方法：首先是组织块培养法，通过这种方法成功建立了中华鳖肾细胞系（PSK）；其次是测序技术，对线粒体 DNA 的 D - loop 区和 16S rRNA 进行测序，确认细胞来源，还通过全基因组测序来分析新型腺病毒的特征；此外，还利用了电子显微镜技术，直观观察病毒粒子。
下面来详细看看研究结果：
- 中华鳖肾细胞系（PSK）的建立：研究人员用标准组织块法，从一只 80g 的健康小中华鳖肾脏出发培养细胞。9 天后，原代细胞从组织块边缘迁移出来，不断向外扩展。最初传代时，细胞既有上皮样又有纤维母细胞样形态。到第 50 天，细胞形成 80% 融合的单层，目前已传代 84 次，成功建立了 PSK 细胞系。
- PSK 细胞系的特性鉴定：通过实验确定 PSK 细胞在添加 15% 胎牛血清的 MEM/EBSS 培养基中生长最佳。对线粒体 DNA 的 D - loop 区和 16S rRNA 测序，证实细胞来源于中华鳖。核型分析显示，第 57 代 PSK 细胞的染色体众数为 2n = 62 。而且，PSK 细胞对中华鳖虹彩病毒（STIV）敏感，感染后会出现明显的细胞病变效应（CPE），通过 PCR 检测 STIV 主要衣壳基因和电镜观察病毒粒子进一步证实了这一点。
- 新型腺病毒的发现与鉴定：用患病中华鳖组织悬液的 0.22μm 滤液接种 PSK 细胞，引发了显著的 CPE，电镜观察到病毒粒子的存在。对感染细胞进行 RNA - seq 分析，组装出 11 个重叠群，都与腺病毒相似。全基因组测序表明，该腺病毒基因组长度为 25,548bp ，两端各有 30bp 的反向末端重复序列（ITRs）。预测基因的数量和排列与 FrAdV - 1 相同，预测蛋白与 FrAdV - 1 相应蛋白的同源性达 80 - 100%。基于 DNA 依赖的 DNA 聚合酶氨基酸序列的系统发育分析显示，该病毒与 Siadenovirus 属的代表性腺病毒聚集在一起。综合唾液酸酶的存在和聚合酶氨基酸序列的系统发育分析结果，研究人员认为这是 Siadenovirus 属的一个新物种，并将其命名为中华鳖腺病毒分离株 1（CSTAdV - 1）。
研究结论表明，研究人员成功建立了连续的中华鳖肾细胞系（PSK），并对中华鳖新型腺病毒（CSTAdV - 1）进行了分子特征描述。CSTAdV - 1 在基因组结构、唾液酸酶的存在以及系统发育关系等方面的特点，都强烈暗示它是 Siadenovirus 属的新物种。这一成果意义非凡，它不仅是首次公布的龟鳖类腺病毒全基因组序列，为腺病毒的分类学研究提供了新的依据，有助于深入了解病毒的进化历程，也为探究病毒与宿主之间的相互作用机制打开了新的大门，对中华鳖养殖业病毒性疾病的防控有着重要的指导意义，有望推动相关疫苗和防控策略的研发，为中华鳖养殖业的可持续发展保驾护航。
