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口腔鳞癌（OSCC）预后差，衰老细胞对其影响未明。研究人员探究衰老血管内皮细胞（VECs）在 OSCC 中的作用。发现顺铂诱导的衰老 VECs 经补体 C3 促进 OSCC 进展，抑制 C3 可抑制肿瘤。为 OSCC 治疗提供新策略。
在癌症的世界里，口腔鳞癌（Oral Squamous Cell Carcinoma，OSCC）是一个让人头疼的难题。它起源于口腔上皮细胞，在头颈部癌症中占比极高 。尽管当前有手术、放疗、化疗等多种治疗手段，但患者的预后情况依旧不理想，五年生存率都不到 60%。对于那些复发和转移的晚期患者来说，治疗选择也十分有限。
细胞衰老，这个被视为癌症特征之一的现象，在肿瘤的发展过程中有着复杂的作用。它既能招募免疫细胞，又能影响肿瘤细胞的增殖。血管内皮细胞（Vascular Endothelial Cells，VECs）作为血管系统的重要组成部分，在肿瘤微环境（Tumor Microenvironment，TME）里也扮演着关键角色，影响着肿瘤的发展和免疫反应。不过，衰老的 VECs 在 OSCC 中到底起什么作用，之前却并不清楚。
为了弄清楚这个问题，四川大学华西口腔医院的研究人员展开了深入研究。他们发现，顺铂诱导的衰老 VECs 能够促进 OSCC 肿瘤的生长和侵袭，而这一过程与补体 C3（Complement C3）的激活密切相关。抑制补体 C3，就可以抑制 OSCC 的进展。这一发现为 OSCC 的治疗提供了全新的方向，意义重大。该研究成果发表在《Archives of Oral Biology》杂志上。
在研究过程中，研究人员运用了多种技术方法。细胞实验方面，进行了衰老相关 β - 半乳糖苷酶（SA - β - gal）染色来判断细胞是否衰老；采用蛋白质免疫印迹（Western blot，WB）分析相关蛋白表达；通过酶联免疫吸附测定（ELISA）检测样本；用细胞计数试剂盒 - 8（CCK - 8）评估细胞增殖，流式细胞术分析细胞周期；还有伤口愈合实验和 Transwell 实验检测细胞迁移和侵袭能力。在动物实验上，构建了 OSCC 细胞的异种移植小鼠模型，还运用了组织病理学、免疫组化（IHC）和多重免疫组化（mIHC）染色等技术来深入探究。
衰老 VECs 的诱导及其特征
研究人员用顺铂处理人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和人真皮微血管内皮细胞（HDMEC）诱导细胞衰老。SA - β - gal 染色显示，随着顺铂刺激时间延长，SA - β - gal 阳性细胞比例增加，且 1μg/ml 顺铂比 0.5μg/ml 效果更明显。CCK - 8 实验发现，1μg/ml 顺铂显著抑制衰老 VECs 的增殖。蛋白质水平上，衰老 VECs 中 p16、p21 和 p53 水平显著上升。流式细胞术分析表明，衰老 VECs 处于 G0/G1期的细胞比例增加，S 期和 G2/M 期减少。伤口愈合实验和 Transwell 实验显示，衰老 VECs 的迁移能力明显降低。这一系列实验证明，顺铂成功诱导了 VECs 衰老，且衰老的 VECs 出现了一系列特征变化。
衰老 VECs 促进 OSCC 细胞增殖和侵袭
研究人员收集衰老 VECs 的条件培养基（CM）进行体外实验。CCK - 8 实验表明，衰老 VECs 的 CM 能显著促进 CAL27 细胞（一种 OSCC 细胞系）的增殖。迁移实验发现，与衰老 VECs 间接共培养的 CAL27 细胞迁移能力增强。Transwell 侵袭实验也显示，衰老 VECs 的 CM 使 CAL27 细胞的侵袭数量增加。在体内实验中，用 OSCC 细胞的异种移植小鼠模型研究发现，与衰老 VECs 共注射的肿瘤，其生长和侵袭能力明显增强。这说明衰老 VECs 在体内外都能促进 OSCC 的发展。
衰老 VECs 中衰老相关分泌表型（SASP）的差异基因表达
通过 RNA 测序（RNA - seq）分析衰老 VECs 的基因表达变化，发现 HUVEC 中有 945 个基因上调，456 个基因下调；HDMEC 中有 402 个基因上调，245 个基因下调。对两种细胞共有的差异表达基因进行分析，发现衰老 VECs 涉及 NF - κB 信号通路、细胞外基质（ECM）等相关通路，且与肿瘤发生过程密切相关。基因集富集分析（GSEA）显示，衰老 VECs 出现了与衰老相关的变化，其中补体 C3 在衰老的 HDMEC 中显著上调，WB 和 ELISA 实验也证实了这一点。这表明补体 C3 可能在衰老 VECs 促进 OSCC 进展中发挥重要作用。
阻断补体 C3 抑制 OSCC 肿瘤进展
研究人员用补体 C3 抑制剂 Compstatin 进行实验。体外实验中，Compstatin 处理后，衰老 VECs 诱导的 CAL27 细胞侵袭和迁移能力与正常 VECs 相比，没有显著差异。体内实验发现，Compstatin 抑制了衰老 VECs 促进的肿瘤生长。免疫组化检测相关标记物发现，虽然各组中 Ki - 67、E - cadherin 和 Vimentin 的表达没有显著差异，但多重免疫组化显示衰老 VECs 中 p16、CD31 和 C3 有特定的分布。这说明阻断补体 C3 确实能够抑制 OSCC 的进展。
研究结论表明，顺铂诱导 HUVEC 和 HDMEC 衰老，衰老的 VECs 通过激活补体 C3 促进 OSCC 细胞的增殖和侵袭。阻断补体 C3 可以抑制这一过程，为 OSCC 的治疗提供了新的潜在策略。在讨论部分，研究人员指出，OSCC 的治疗面临着转移和复发的难题，细胞衰老在肿瘤发展中有复杂作用，衰老 VECs 会分泌多种物质影响肿瘤行为。虽然补体系统传统上被认为有抗癌作用，但补体 C3 在 OSCC 中却促进了肿瘤进展。这项研究揭示了衰老 VECs 和补体 C3 在 OSCC 中的重要作用，为后续的抗癌治疗提供了新的思路和潜在靶点，有望推动 OSCC 治疗方法的进一步发展 。
