单细胞测序揭示 T - 幼淋巴细胞白血病中恶性与非恶性细胞的克隆奥秘

T - 幼淋巴细胞白血病（T-PLL）治疗棘手且预后差。为探究其克隆起源与进化，研究人员对 16 例患者样本进行靶向二代测序（NGS）及单细胞分析。发现 T-PLL 克隆进化多样，非恶性 B 细胞与克隆性 T 细胞存在共享突变，为研究 T-PLL 发病机制提供新视角。

　　

T - 幼淋巴细胞白血病（T-PLL）是一种源于成熟 T 细胞的侵袭性肿瘤，年发病率虽低，但却是常见的成熟 T 细胞白血病之一。患者常表现为全身疾病，治疗选择有限。多数患者对单药阿仑单抗（一种抗 CD52 抗体）初始治疗有反应，但易复发，部分患者虽可长期生存，但最终仍会发病。异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）虽能使部分患者获得持久缓解，但适用人群有限。与高侵袭性 B 细胞恶性肿瘤相比，T-PLL 预后更差。目前，针对 T-PLL 的克隆起源和进化动态的研究尚少，因此，开展相关研究对深入了解 T-PLL 的发病机制和开发新的治疗策略具有重要意义。

瑞典乌普萨拉大学医院的研究人员为了探究 T-PLL 白血病发生过程中相关基因的突变情况，进而阐明该疾病的克隆起源和进化，开展了一项研究。他们对 16 例 T-PLL 患者诊断和复发时的配对样本进行了靶向二代测序（NGS），并结合单细胞分析等技术进行研究。研究发现，T-PLL 在诊断和复发之间呈现出多种克隆进化模式；非恶性 B 细胞和克隆性 T 细胞存在共享的突变特征；还观察到 1 例患者可能存在潜在种系起源的 ATM 基因突变。这一研究为理解 T-PLL 的发病机制提供了新的视角，对未来开发更有效的治疗方法具有重要意义。该研究成果发表在《Blood Neoplasia》杂志上。

研究人员采用了多种关键技术方法。首先是样本采集与细胞分离，收集 16 例患者的骨髓抽吸物和外周血样本，通过磁珠分离等技术获取不同细胞群体。接着进行 DNA 测序，利用定制的 HaloPlex 基因面板对提取的基因组 DNA（gDNA）进行 NGS 测序。同时，运用液滴数字聚合酶链反应（ddPCR）对低变异等位基因频率的突变进行验证。最后，使用 Mission Bio Tapestri Platform 对 2 例患者样本进行单细胞 DNA 和蛋白质多组学分析。

研究结果如下：

• 患者临床特征：16 例患者中，中位诊断年龄为 69 岁，14 例患者已故。8 例患者接受阿仑单抗治疗，部分后续进行 allo-HSCT。患者从诊断到首次治疗的平均时间为 14 个月，平均总生存期为 24 个月。

• 基因变异情况：诊断时，最常突变的基因是 ATM（n=10），其次是 STAT5B（n=7）等。在 11 例患者中检测到 21 个致病性（P）或可能致病性（LP）变异，复发样本（n=9）中检测到 14 个 P/LP 变异。部分患者在诊断时未检测到变异。

• 克隆进化模式：对 9 例有诊断和复发样本的患者分析发现，克隆进化模式多样。部分患者基因突变的变异等位基因频率（VAF）在复发时增加，部分降低，部分既有增加又有降低，还有患者在诊断和复发时均未检测到突变。

• 突变验证与单细胞分析：通过 ddPCR 验证了部分患者样本中突变的存在，且与 NGS 结果一致。单细胞多组学分析显示，患者 2 的几乎所有 T 细胞中都检测到 ATM 和 STAT5B 突变；患者 6 的 B 细胞和 T 细胞中均检测到 ATM 和 EZH2 突变。

研究结论表明，T-PLL 在诊断和复发之间的克隆进化模式多样。单细胞多组学分析揭示了非恶性 B 细胞和克隆性 T 细胞存在共享的突变特征。此外，研究还发现了 1 例患者可能存在潜在种系起源的 ATM 基因突变，虽然其在 T-PLL 发病机制中的作用尚待进一步研究，但这一发现为深入理解 T-PLL 的发病机制提供了新线索。研究的局限性在于采用靶向研究方法，可能遗漏其他基因变异，且缺乏细胞遗传学数据。总体而言，该研究为 T-PLL 的研究开辟了新方向，有助于推动针对 T-PLL 的精准治疗和预防策略的发展。