NR2F2调控口腔鳞癌干细胞特性促进淋巴结转移的机制研究

本研究针对口腔鳞状细胞癌(OSCC)淋巴结转移(LNM)机制不清的临床难题，聚焦癌症干细胞(CSCs)中核受体NR2F2的关键作用。研究人员通过单细胞测序发现高干性CSC亚群特征，结合免疫组化验证NR2F2在转移淋巴结中的过表达，构建基因修饰细胞模型证实NR2F2通过增强干性、增殖和迁移能力促进转移，并筛选出靶向药物曲美替尼(Trametinib)，为OSCC转移防治提供新靶点。

　　

口腔鳞状细胞癌(OSCC)作为头颈部常见恶性肿瘤，其五年生存率在发生淋巴结转移(LNM)时会从50%骤降至30%。尽管颈淋巴结清扫是标准治疗手段，但术后并发症严重影响患者生活质量。更棘手的是，约44%的OSCC患者会出现LNM，而目前对转移机制的理解仍存在重大空白。癌症干细胞(CSCs)因其自我更新和多向分化能力被视为肿瘤转移的"种子细胞"，其中CD44阳性细胞群在头颈鳞癌中被公认为CSCs标志物。然而，CSCs如何驱动OSCC淋巴结转移的分子机制尚未阐明，这成为阻碍临床治疗突破的关键科学问题。

武汉大学研究团队在《Cellular Signalling》发表的研究中，创新性地通过整合单细胞转录组测序(scRNA-seq)和功能实验，揭示核受体NR2F2是调控OSCC干细胞特性并促进LNM的核心分子。研究人员首先分析GSE164690和GSE188737两个公共数据库的单细胞数据，利用CytoTRACE算法评估细胞干性，通过GSVA富集分析发现NR2F2在高干性CSC亚群中特异性高表达。免疫荧光双标证实NR2F2与CD44在转移淋巴结中共定位，临床样本显示NR2F2表达与LNM显著相关。

关键技术包括：1)基于GEO数据库获取8例OSCC原发灶和7例转移淋巴结的单细胞数据；2)采用irGSEA计算基因集评分；3)建立NR2F2过表达/敲除细胞模型；4)通过Transwell和划痕实验评估迁移能力；5)利用小鼠模型验证体内促转移作用；6)采用批量RNA测序解析下游通路。

【Heterogeneity of CSCs in OSCC at the transcriptional level】
单细胞聚类将OSCC的CSCs划分为5个功能亚群，其中CSC4亚群干性评分最高且富集EMT(上皮-间质转化)通路。NR2F2在CSC4中表达量是其他亚群的3.2倍，且在转移淋巴结中显著上调。

【NR2F2 enhances stemness and metastatic potential】
过表达NR2F2使细胞球形成率提升2.1倍，CD44和OCT4蛋白表达增加；Transwell实验显示迁移细胞数增加187%。小鼠模型证实NR2F2促进原发灶生长(肿瘤体积增大2.4倍)和淋巴结转移(转移率从30%升至80%)。

【Mechanistic exploration】
RNA-seq揭示NR2F2激活Wnt/β-catenin和Notch信号通路。药物敏感性分析发现MEK抑制剂曲美替尼对NR2F2高表达细胞具有选择性杀伤作用(IC₅₀降低62%)。

该研究首次在单细胞层面解析OSCC干细胞的异质性，确立NR2F2作为连接干细胞特性与转移的关键分子。临床意义在于：1) NR2F2可作为LNM预测标志物；2) 阐明"干性-转移"调控轴为NR2F2/CD44共靶向治疗提供依据；3) 曲美替尼的筛选为个体化治疗开辟新途径。研究创新性地将计算生物学与实验验证相结合，为逆转OSCC化疗抵抗和抑制转移提供了理论支撑。