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炎症性肠病（IBD）病因不明，研究人员围绕 CNPY2 在结肠炎中的作用展开研究。发现敲除Cnpy2基因的小鼠对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的结肠炎更具抵抗力，揭示 CNPY2 通过巨噬细胞 - ROS 轴加重结肠炎，为 IBD 治疗提供新方向。
在人体的消化系统中，肠道就像一个繁忙的 “交通枢纽”，每天都要处理大量的食物和各种物质。然而，有一种疾病却常常给肠道带来麻烦，这就是炎症性肠病（IBD）。它包括溃疡性结肠炎和克罗恩病等，会让肠道陷入慢性炎症的困境。目前，IBD 的发病机制还没有完全弄清楚，虽然知道它和遗传、环境以及免疫系统都有关系，但具体是怎么回事，科学家们还在努力探索。特别是内质网（ER）应激和肠道炎症之间的联系，更是一个充满谜题的领域。虽然有研究发现未折叠蛋白反应（UPR）和肠道炎症有关，但其中的具体机制依旧模糊不清。在这样的背景下，研究 CNPY2 在结肠炎中的作用就显得尤为重要，它或许能成为解开 IBD 发病机制谜团的一把关键钥匙。
美国俄亥俄州立大学的研究人员针对这一问题展开了研究。他们发现，CNPY2 在驱动结肠炎发展中起着不可或缺的主导作用，它主要通过调节巨噬细胞中细胞因子和活性氧（ROS）的产生来发挥作用，而且 CNPY2 对 ROS 产生的调控部分是通过 CHOP 实现的。这一研究成果发表在《Biomedicine》上，为深入理解 IBD 的发病机制和寻找新的治疗靶点提供了重要依据。
在这项研究中，研究人员运用了多种关键技术方法。他们构建了Cnpy2基因敲除（KO）小鼠模型，通过精心设计的基因编辑步骤，成功得到实验所需小鼠。实验中采用葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠患结肠炎，以此模拟疾病发生过程。同时，利用免疫组化染色检测 CNPY2 表达情况，借助流式细胞术分析免疫细胞，还运用 ELISA 测定细胞因子水平，这些技术手段为研究提供了有力支撑 。
研究结果如下：
- CNPY2 在 IBD 患者结肠组织中表达升高：研究人员利用公开的 IBD 转录组和元转录组荟萃分析（IBD TaMMA）平台，分析了 IBD 患者中 CNPY2 的 mRNA 表达。结果显示，CNPY2 在 IBD 患者肠道组织中高表达，并且其 mRNA 水平与疾病阶段呈正相关。免疫组化染色进一步证实，在克罗恩病和溃疡性结肠炎患者的结肠中，CNPY2 的表达明显高于健康对照组。这表明 CNPY2 可能与 IBD 的发生发展密切相关。
- CNPY2 基因敲除保护小鼠免受 DSS 诱导的结肠炎：研究人员给小鼠喂食含有 3% DSS 的水 5 天，诱导结肠炎发生。结果发现，Cnpy2基因敲除的小鼠体重下降和结肠缩短的情况比野生型小鼠明显减轻，粪便稠度评分也更低。组织学检查显示，野生型小鼠结肠炎症更严重，有绒毛缩短、单核细胞浸润、隐窝 - 绒毛结构破坏和杯状细胞缺失等问题，而敲除小鼠的这些症状则较轻。此外，DSS 诱导的 CHOP UPR 水平在野生型小鼠结肠中显著升高，在敲除小鼠结肠中却没有变化，这说明 CNPY2 基因敲除对小鼠结肠炎有保护作用。
- Cnpy2基因缺失不影响上皮再生：研究人员给小鼠灌胃荧光素异硫氰酸酯（FITC） - 葡聚糖，检测血液中其水平，以此评估肠道屏障完整性。结果发现，Cnpy2基因敲除小鼠血液中 FITC - 葡聚糖水平明显低于野生型小鼠，说明敲除小鼠肠道屏障破坏程度较轻。同时，用 BrdU 标记结肠上皮细胞，发现野生型和敲除小鼠在未处理和接受 DSS 处理后，结肠中 BrdU 阳性上皮细胞数量没有显著差异，这表明上皮再生不是导致疾病易感性差异的原因。
- Cnpy2基因敲除小鼠在 DSS 诱导的结肠炎中巨噬细胞浸润减少：研究人员分析了野生型和Cnpy2基因敲除小鼠在 DSS 诱导的结肠炎中的免疫表型差异。结果发现，两种小鼠结肠固有层中 CD4? T 细胞和 CD8? T 细胞的浸润没有显著差异，CD4 T 细胞的活化状态也没有不同。但是，Cnpy2基因敲除小鼠结肠固有层中 CD11b?/F4/80?巨噬细胞数量显著减少，而肠系膜淋巴结中的巨噬细胞数量却增加了，这可能是敲除小鼠结肠炎症状较轻的原因之一。
- Cnpy2基因敲除小鼠结肠中促炎细胞因子产生减少：研究人员测量了 DSS 诱导的结肠炎小鼠全结肠中 IL - 1β、IL - 6、TNFα 和 IL - 10 等细胞因子的水平。结果发现，Cnpy2基因敲除小鼠结肠中 IL - 1β、IL - 6 和 TNFα 的水平均低于野生型小鼠，而 IL - 10 的水平不受影响。进一步分离固有层巨噬细胞（LPM?s）进行 qRT - PCR 检测，发现敲除小鼠 LPM?s 中 IL - 1β、IL - 6 和 TNFα 的 mRNA 水平也显著降低，这说明Cnpy2基因敲除会减少促炎细胞因子的产生。
- Cnpy2基因敲除减少 DSS 诱导的结肠炎中的 ROS 生成：研究人员分离 DSS 诱导的结肠炎小鼠第 7 天的 LPM?s，用 H2DCF - DA 染色后进行流式细胞术分析，发现Cnpy2基因敲除小鼠巨噬细胞中的 ROS 水平明显低于野生型小鼠。用 shRNA 敲低 RAW264.7 巨噬细胞中的Cnpy2基因，发现衣霉素诱导的 ROS 产生减少，而过表达 CHOP 可以部分挽救 ROS 的减少，这表明 CNPY2 至少部分通过 CHOP 调节巨噬细胞中的 ROS 产生。给 DSS 诱导的结肠炎小鼠使用 ROS 清除剂 N - 乙酰 - L - 半胱氨酸（NAC）后，发现 NAC 可以减轻野生型小鼠的体重下降，还能完全消除Cnpy2基因敲除小鼠的结肠炎症状。
研究结论和讨论部分指出，巨噬细胞在结肠炎的发展、进展和消退过程中起着至关重要的作用，其激活状态和所处的炎症环境决定了它的作用是保护还是致病。CNPY2 可以调节 IL - 6 和 TNFα 的产生，还可能调节巨噬细胞的迁移。ROS 在结肠炎的发病机制中也扮演着重要角色，过量的 ROS 会导致氧化应激，破坏肠道上皮屏障，加剧炎症反应。而 CNPY2 对 ROS 产生的调控，至少部分是通过 UPR 依赖的途径实现的。这项研究揭示了 CNPY2 在结肠炎发生发展中的关键作用，为深入理解 IBD 的发病机制提供了新的视角，也为开发针对 IBD 的新治疗策略提供了潜在的靶点，具有重要的理论和临床意义。
