探秘虾病 “元凶”：胆汁酸与牛磺胆酸盐对 AHPND 致病弧菌的影响及非 QS 调控机制

在虾类养殖中，急性肝胰腺坏死病（AHPND）严重阻碍产业发展。研究人员以副溶血性弧菌（VP）为对象，探究胆汁酸和牛磺胆酸盐对其致病性的影响。结果发现二者可诱导生物膜形成和 PirABvp毒素释放，且不依赖 LuxO - OpaR 群体感应（QS）级联反应，为防治 AHPND 提供新方向。

　　在虾类养殖蓬勃发展的当下，虾却频繁遭受疾病侵袭，急性肝胰腺坏死病（Acute hepatopancreatic necrosis disease，AHPND）便是其中的 “狠角色”。AHPND 在东南亚地区肆意蔓延，给虾类养殖业带来沉重打击。它由携带毒力 pVA1 质粒（含 PirAB^vp毒素基因）的特定副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，VP）菌株引发。被感染的虾活力大减、食欲不振，肝胰腺变得苍白，胃和中肠空空如也，养殖户们看着辛苦养殖的虾大批死亡，损失惨重。

为了应对这一难题，科研人员不断探索。此前研究虽发现宿主因素和病原体因素影响 AHPND 发病机制，但群体感应（Quorum sensing，QS）在其中的作用却一直模糊不清。QS 是细菌基于细胞密度进行细胞间通信、调控毒力因子的重要机制。同时，胆汁酸和牛磺胆酸盐作为虾饲料常见添加剂，适量添加有助于虾生长，过量则危害虾的健康，它们对 AHPND 致病 VP 的影响也有待明确。在这样的背景下，来自国内的研究人员开启了这项关键研究。

研究人员巧妙构建了野生型副溶血性弧菌（VP）、AHPND 致病菌株 3HP，以及 3HP 的 LuxO 和 / 或 OpaR QS 突变体（ΔopaRΔluxO、ΔopaR、ΔluxO和luxO^D47E）。利用这些菌株，他们开展了一系列实验，观察胆汁酸和牛磺胆酸盐对 AHPND 致病 VP 的影响。研究结果意义重大，表明胆汁酸和牛磺胆酸盐能够诱导野生型和 QS 突变体 VP 菌株形成生物膜，并释放 PirAB^vp毒素。这一发现意味着，它们可能通过不依赖 LuxO - OpaR QS 的方式影响 AHPND 致病 VP 的毒力机制。该研究成果发表在《Aquaculture》上，为理解宿主 - 病原体相互作用以及 QS 在 AHPND 致病 VP 生物膜形成和毒素产生中的分子机制提供了宝贵线索，为虾类养殖中 AHPND 的防治开辟了新思路。

在研究过程中，研究人员主要运用了以下关键技术方法：一是构建基因 - 基因相关网络，从胆汁酸处理的 AHPND 致病 VP 菌株 5HP 转录组数据库中筛选差异表达基因构建网络，研究胆汁酸诱导的基因表达变化；二是对筛选出的基因进行实时荧光定量 PCR（qRT - PCR），验证其基因表达情况，以此探究胆汁酸和牛磺胆酸盐对相关基因表达的影响。

基因 - 基因相关网络的构建

研究人员利用 ContigViews 软件，基于胆汁酸处理的 AHPND 致病 VP 菌株 5HP 的转录组数据库开展工作。他们筛选出差异表达至少 2 倍的基因（437 个重叠群），将其与处理后即刻（i hpt）胆汁酸处理组和未处理对照组对比，最终确定 69 个重叠群构建基因 - 基因相关网络，设定阈值≥0.99 。通过这一网络，研究人员能够直观地看到胆汁酸处理后基因之间的相互关系，为后续深入研究奠定基础。

胆汁酸响应基因的研究

研究人员培养 AHPND 致病菌株 5HP，设置添加 0.25% 粗胆汁酸处理组和未处理对照组，在不同时间点收集样本。选取i hpt 时间点样本，从转录组数据库中挑选出差异表达至少 2 倍的候选目标基因（437 个重叠群），进一步分析胆汁酸处理对这些基因表达的影响。这一研究让研究人员锁定了受胆汁酸调控的关键基因，为揭示胆汁酸影响 VP 致病机制提供了重要线索。

在讨论部分，研究人员指出，随着人们对食物需求的增长，虾类养殖规模不断扩大，在饲料中添加胆汁酸或其主要成分成为常见做法。然而，本研究揭示了胆汁酸和牛磺胆酸盐会影响 AHPND 致病 VP 的毒力，这提醒人们在使用这些添加剂时需谨慎权衡利弊。该研究成果不仅加深了人们对 AHPND 发病机制的理解，更为虾类养殖产业制定科学合理的疾病防控策略提供了理论依据。未来，有望基于此研究成果，开发出更安全有效的虾类饲料添加剂，减少 AHPND 对虾类养殖的危害，助力虾类养殖业健康发展。