纳米级蛋白共定位揭示网格蛋白包被中分子复合物的层状组织：解析内吞前关键机制

超分辨率显微镜虽可达纳米级分辨率，但分子复合物共定位分析受限于标记密度。研究人员开展了利用多重超分辨率成像定量绘制分子复合物的研究，揭示了网格蛋白包被结构（CCS）内多层复合物形成机制，为探究内吞过程提供重要依据。

　　超分辨率显微镜能够实现几纳米的分辨率，然而在分子复合物中的共定位分析却受其标记密度的限制。在此，研究人员提出一种利用多重超分辨率成像结合可交换单分子定位（IRIS）对分子复合物进行定量映射的方法。研究人员开发了源自抗血清的 Fab IRIS 探针，用于对内源蛋白进行高密度标记，并采用蛋白簇着色（PC - 着色）技术，该技术运用基于像素的主成分分析和聚类算法。PC - 着色能够绘制出多种蛋白比例不同的区域，并且在每个区域中，通过计算两种蛋白之间的相关性来评估复合物的形成情况。PC - 着色揭示了内吞作用发生前，网格蛋白包被结构（CCS）中存在多层复合物的形成过程。在表皮生长因子（EGF）刺激下，以表皮生长因子受体（EGFR）为主导的区域、EGFR - Grb2 复合物区域以及以 Grb2 为主导的区域，从 CCS 边缘外侧开始依次排列。在以 Grb2 为主导区域的内部，CCS 的组成成分（Eps15、FCHo1/2 和 intersectin - 1）与 Grb2 形成复合物，且远离 EGFR。以 Grb2 为主导的区域以及 Grb2 - CCS 成分复合物的形成，可能决定了 EGFR 在 CCS 边缘的募集位点。