“Mukungulu”：激活蛋白激酶 C，助力 HIV 潜伏逆转的非洲药用植物提取物

本文研究了源自非洲植物的 “Mukungulu” 提取物。它能激活蛋白激酶 C（PKC），在体外和体内实验中有效逆转 HIV（人类免疫缺陷病毒）潜伏，且具有一定耐受性。这为 HIV 治愈和无抗逆转录病毒疗法（ART）缓解带来新希望。

　　

引言

抗逆转录病毒疗法（ART）虽降低了 HIV/AIDS 相关发病率和死亡率，但无法治愈 HIV。HIV 潜伏库的存在是治愈的主要障碍，感染者需终身接受 ART 治疗，且长期使用会带来非艾滋病共病。

利用潜伏逆转剂（LRAs）激活 HIV - 1 表达，结合免疫疗法清除潜伏感染细胞，即 “shock - and - kill” 或 “kick - and - kill” 策略，是消除 HIV 潜伏库的重要方法。众多 LRAs 已被发现，但其在体外（ex vivo）和体内（in vivo）模型中的研究还不充分。

“Mukungulu” 是由巴豆属植物（Croton megalobotrys Müll Arg.）树皮制备的传统药物，在博茨瓦纳北部用于 HIV/AIDS 治疗。此前研究发现其粗提物可逆转 HIV 潜伏，含有类似佛波酯（phorbol esters）的成分，可能通过激活 PKC 发挥作用，暗示其可能是新型 LRA，本研究将进一步探究其潜力。

结果

1. 从 Mukungulu 粗提物中分离佛波酯类 LRAs（“namushens”）：通过生物测定引导的分级分离，从 Mukungulu 粗提物中除了重新分离出之前发现的 namushen 1 和 2，还鉴定出 3 种新的佛波酯类物质 namushen 3、4 和 5。与佛波醇 12 - 肉豆蔻酸酯 13 - 乙酸酯（PMA）相比，namushens 的半数有效浓度（EC₅₀）较高，活性约为 PMA 的 1/10 - 1/30，表明它们单独使用时可介导潜伏逆转。
2. 不同 Mukungulu 粗提物中 namushen 水平相似，但不能完全重现其体外潜伏逆转活性：利用液相色谱 - 质谱（LC - MS）分析发现，namushens 约占 Mukungulu 总可溶性成分的 1% - 3%，不同来源的提取物中其比例和含量大致一致，但存在一定差异。将 namushen 混合物按粗提物中的比例和浓度重构后，在 J - Lat 10.6 细胞中测试，其潜伏逆转活性远低于完整的 Mukungulu 粗提物，说明除 namushens 外，可能还有其他成分增强其活性。
3. Mukungulu 在接受 ART 稳定抑制的 HIV 感染者外周血单个核细胞（PBMC）中强烈逆转 HIV - 1 潜伏：从 10 名接受 ART 抑制的 HIV 感染者获取 PBMC，分析其 CD4⁺T 细胞比例和原病毒水平。用 1μg/mL 的 Mukungulu 处理 PBMC 72 小时后，发现其细胞活力良好，且诱导产生的 HIV gag - p24 蛋白水平显著高于阳性对照抗 CD3/CD28，表明 Mukungulu 能更有效地逆转 HIV 潜伏。
4. LRAs 在 PBMC 中诱导的潜伏逆转与 CD4⁺T 细胞中完整 HIV 原病毒水平相关：将刺激后的 PBMC 中 HIV gag - p24 蛋白产生量与 CD4⁺T 细胞中原病毒水平比较，发现 Mukungulu 和抗 CD3/CD28 诱导的 HIV - 1 gag - p24 水平与完整原病毒水平显著相关，与总原病毒或缺陷原病毒水平无明显相关性，说明 LRAs 诱导的 HIV 重新激活主要与完整原病毒水平有关。
5. Mukungulu 在接受 ART 稳定抑制的 HIV 感染者分离的 CD4⁺T 细胞中逆转 HIV - 1 潜伏：选取 HIV 原病毒载量较高的 PBMC，分离 CD4⁺T 细胞，用 Mukungulu 或抗 CD3/CD28 处理。结果显示，Mukungulu 处理的 CD4⁺T 细胞活力良好，且诱导产生的 gag - p24 蛋白水平显著高于未处理细胞，在培养上清液中也观察到类似趋势。同时，单独使用 namushen 混合物的潜伏逆转效果不如 Mukungulu，再次表明 Mukungulu 中可能存在其他增强 HIV 重新激活的成分。
6. Mukungulu 提取物在体内具有耐受性并能逆转潜伏：给 CD - 1 小鼠腹腔注射不同剂量的 Mukungulu，发现小鼠在高达 12.5mg/kg 的剂量下可耐受，虽有暂时副作用，但体重等无明显变化。在 ART 抑制的 HIV 感染人源化骨髓 - 肝脏 - 胸腺（BLT）小鼠模型中，5mg/kg 的 Mukungulu 处理 24 小时后，可检测到病毒表达，血浆病毒载量（pVL）和细胞相关病毒 RNA 水平显著升高，表明 Mukungulu 在体内是一种有效的 LRA，但 HIV 感染的 BLT 人源化小鼠对其耐受性不如野生型小鼠。

讨论

Mukungulu 在体外 PBMC 和 CD4⁺T 细胞以及体内人源化小鼠模型中均表现出强大的潜伏逆转活性，且在一定剂量下具有耐受性，与其他佛波酯类的体内毒性形成对比。其传统的单剂量使用方式与患者健康改善相关，提示它与 ART 联合使用可能也具有耐受性。

Mukungulu 中已鉴定出 5 种 namushen 佛波酯，占总植物化学成分的 1.2% - 3.1%，不同提取物中其含量存在差异，未来开发其作为 LRA 疗法需标准化和确定最佳浓度。此外，namushen 混合物不能完全重现粗提物的潜伏逆转效果，可能存在其他未鉴定的植物成分增强其活性。

Mukungulu 在 PBMC 和 CD4⁺T 细胞中的潜伏逆转活性优于或与抗 CD3/CD28 相当，且与 CD4⁺T 细胞中完整原病毒载量相关。在体内实验中，虽 HIV 感染的人源化小鼠对 Mukungulu 耐受性较差，但它能有效激活 HIV 表达，其活性与其他已报道的药物相当。

本研究存在局限性，研究对象均为美国东北部的男性，主要为 HIV B 亚型，而博茨瓦纳和南部非洲主要为 C 亚型，未来需扩展研究。同时，Mukungulu 在小鼠和人类中的给药方式不同，也需进一步研究优化给药策略。

总之，Mukungulu 是一种有潜力的 LRA，传统药用植物在 HIV 治疗中的作用值得深入挖掘，未来需在更多模型中研究其体内毒性阈值、药代动力学以及对病毒库的影响。