突破！利用 CD138 分选骨髓细胞制备产生人免疫球蛋白轻链的异源杂交瘤

为解决人类免疫球蛋白游离轻链（FLC）研究缺乏相关细胞系的问题，研究人员利用异源杂交瘤（HH）技术，用骨髓瘤和多克隆丙种球蛋白病患者骨髓 CD138+细胞制备 HH 克隆。结果获得能产生 FLC 的 HH 克隆，这为研究 FLC 代谢和治疗药物测试提供了工具。

　　在生命科学和健康医学领域，人类免疫球蛋白游离轻链（FLC）就像神秘的 “小幽灵”，尽管它在人体中广泛存在，可人们对它的了解却少之又少。完整的免疫球蛋白分子需要重链和轻链携手配对，才能形成有功能的结构。但 FLC 却很 “特立独行”，它能独自分泌进入血液，而重链没有轻链的陪伴则无法分泌。在血液系统恶性肿瘤、自身免疫性疾病和感染性疾病中，FLC 的测量和活性虽有研究，可它在这些疾病以及代谢过程中的具体作用，仍然隐藏在重重迷雾之中。不仅如此，针对 FLC 的治疗干预，如抑制其翻译、分泌，或者稳定、清除循环中的 FLC 及病理沉积物等，都缺乏有效的体内测试模型。正是在这样的背景下，为了揭开 FLC 的神秘面纱，来自国外（文中研究由 Tufts Medical Center 的研究人员开展）的研究人员踏上了探索之旅，相关研究成果发表在《Biochemistry and Biophysics Reports》上。

研究人员为了深入了解 FLC，开展了一系列研究。在这项研究中，主要用到了以下关键技术方法：首先，从多发性骨髓瘤（MM）和多克隆丙种球蛋白病（PG）患者的骨髓中获取样本，通过免疫磁珠分选技术分离出 CD138⁺细胞；然后，将这些细胞与 B5-6 T 细胞进行融合，利用 ELISA 和流式细胞术筛选出能产生 FLC 的异源杂交瘤（HH）克隆；最后，通过免疫印迹和基因测序对 HH 克隆进行分析，并将其植入 NOD-SCID γ（NSG）小鼠体内进行体内研究。

下面来看看具体的研究结果：

• 患者相关情况：研究人员收集了 13 例患者的骨髓样本，包括 10 例 MM 和 3 例 PG 患者。成功融合产生 HH 克隆的患者中，骨髓单个核细胞（MNC）和 CD138⁺细胞数量显著高于融合失败的患者。这表明，较高数量的 MNC 和 CD138⁺细胞对成功融合至关重要。
• HH 克隆评估：通过细胞内流式细胞术和 ELISA 对融合后增殖的细胞及其上清液进行评估，发现 8 个 HH 克隆能产生 FLC，其中 7 个产生 λ 轻链，1 个产生 κ 轻链 。这些克隆细胞内 FLC 的平均荧光强度（MFI）中位数为 9849，细胞内阳性细胞百分比中位数为 88%。体外培养 2 天后，每百万个细胞产生 FLC 的中位数为 47μg/mL；将 2×10⁶个 HH 细胞腹腔注射到 NSG 小鼠体内 14 天后，小鼠血清中 FLC 的中位数为 66.4μg/mL。此外，体外和体内的二聚体 / 单体（D/M）比值存在差异，体内的 D/M 比值更高，且两者具有相关性（R² = 0.565）。这说明 FLC 在体外和体内的存在形式有所不同，体内环境可能影响其聚合状态。
• 序列分析：对 8 个 HH 克隆产生的 FLC 进行基因序列分析，发现其胚系供体均可通过 IMGT 工具识别。其中，5 个产生 λ FLC 的克隆来源于非 AL 浆细胞疾病中常见的胚系供体，2 个来源于 AL 中常见的胚系供体。这为进一步了解 FLC 的来源和分类提供了依据。

研究结论和讨论部分意义重大。研究人员成功制备出能产生人 FLC 的 B5-6 T HH 克隆，且 50% 的 MM 和 PG 病例中都获得了这样的克隆。这些 HH 克隆在体外和体内都能产生易于观察的 FLC 二聚体和单体，且体内植入 2 周后比体外短期培养能观察到更多二聚体。这些 HH 克隆为研究 FLC 代谢以及测试旨在消除 FLC 产生或促进其体内清除的治疗方法提供了有力工具，有助于推动对 FLC 相关疾病的理解和治疗进展，为后续的基础研究和临床应用奠定了坚实基础。