创新检测方法:保障疟疾与病毒出血热共患风险患者精准诊断安全

【字体: 时间:2025年04月25日 来源:Malaria Journal 2.4

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  疟疾与病毒出血热(VHF)症状相似,诊断困难。研究人员评估了 Alethia Malaria 环介导等温扩增(LAMP)检测和 EasyNAT Malaria 交叉引物检测(CPA)在含病毒灭活缓冲液样本中的诊断准确性,结果显示两种检测均表现出色,该方法可用于相关患者的疟疾诊断,保障检测安全。

  在世界上一些地区,疟疾和病毒出血热(VHF)就像一对 “难缠的兄弟”,给医疗工作者带来了极大的挑战。疟疾,这种由疟原虫属原生动物引起的发热性疾病,每年都无情地夺走约 60 万人的生命。而在部分地区,尤其是撒哈拉以南非洲,疟疾还和如埃博拉、拉沙、马尔堡等病毒出血热病毒共同存在。从这些地区来的患者,或者是从那儿旅行回来的人,他们所表现出的症状常常让医生们感到困惑,因为疟疾和病毒出血热的症状有很多重叠之处,这就给诊断工作增加了很大的难度。
在这种情况下,快速且准确地诊断疟疾就显得至关重要。毕竟,这些患者中疟疾的发病可能性要远远高于病毒出血热。及时诊断疟疾,能够有效预防患者病情恶化,降低死亡率。然而,一旦怀疑患者可能患有病毒出血热,就需要采取极为严格的安全措施,比如样本处理必须在至少生物安全 3 级(BSL - 3)的设施中进行,这不仅使得疟疾的诊断过程变得复杂,还会造成诊断的延迟。

为了解决这个棘手的问题,来自阿姆斯特丹大学医学中心(Amsterdam UMC)等机构的研究人员展开了一项重要的研究。他们的研究成果发表在了《Malaria Journal》上,为相关疾病的诊断带来了新的希望。

研究人员主要采用了两种关键技术方法:一是核酸扩增检测(NAATs)中的环介导等温扩增(LAMP)检测;二是交叉引物检测(CPA)。研究样本来自 2017 年至 2023 年期间,从疑似疟疾患者身上采集的 47 份经显微镜确诊为疟疾的残留乙二胺四乙酸(EDTA)全血样本,以及 5 份未患疟疾的患者全血样本。这些样本最初采集后被冷冻保存在 - 80℃。

在研究结果方面,研究人员首先对两种检测方法在混合样本中的诊断准确性进行了评估。结果显示,所有含有疟原虫的 47 份混合样本,在 LAMP 检测和 CPA 检测中均呈阳性;而 5 份不含疟原虫 DNA 的混合样本,在两种检测中均为阴性。这表明这两种检测方法在检测混合样本中的疟原虫 DNA 时,表现非常出色。

接着,研究人员测定了两种检测方法的技术检测限。他们将一名恶性疟原虫(P. falciparum)疟疾患者的全血样本,按不同比例稀释后与 DNA/RNA Shield 缓冲液混合。结果发现,LAMP 检测和 CPA 检测对恶性疟原虫的技术检测限在每微升混合物 0.005 - 0.0005 个寄生虫之间。这一检测限远低于临床样本中疟原虫的密度,意味着这两种检测方法具有较高的灵敏度。

在研究结论和讨论部分,LAMP 检测和 CPA 检测在检测混合样本中所有疟原虫属的 DNA 方面表现优异。尽管此次研究的样本数量相对较少,但样本涵盖了所有四种主要疟原虫种类,且寄生虫密度从低到高都有,具有临床代表性。不过,研究也存在一定的局限性,比如对于全血与缓冲液更高稀释度下两种检测方法的性能未进行广泛评估。在实际临床操作中,如果静脉穿刺不理想,导致采集管中的血液量较少,此时对于检测结果的阴性判断需要格外谨慎。

此外,直接将血液采集到含病毒灭活缓冲液的管子中,是一种非常实用的方法。它不仅提高了从床边到实验室样本处理的安全性,还能在不影响疟疾诊断速度和准确性的前提下,将生物安全风险降低到生物安全 2 级(BSL - 2)。这对于那些高度怀疑患有疟疾,但又不能完全排除病毒出血热的患者来说,具有重要的意义。在非疟疾流行地区,这种方法可以应用于诊断从疟疾流行地区返回的旅行者是否感染疟疾,为临床诊断提供了一种安全、快速且准确的新途径。

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