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为解决 PD-1 阻断治疗食管鳞状细胞癌（ESCC）响应率低，缺乏有效预测生物标志物的问题，研究人员开展相关研究。他们评估肿瘤浸润 T 淋巴细胞（TILs）等指标，发现 CD8+、CCR8+细胞计数等可作预测标志物，有助于制定个性化治疗策略。
在癌症的战场上，食管癌一直是个 “狠角色”，它是全球癌症死亡的第六大主因 ，其中食管鳞状细胞癌（ESCC）最为常见，约占食管癌病例的 90%。许多 ESCC 患者在确诊时，病情已发展到无法手术切除的地步，即便部分患者接受了根治性切除，仍有超过半数会复发。对于那些无法切除或已发生转移的 ESCC 患者而言，预后情况更是不容乐观，他们的中位总生存期仅有 8 - 10 个月，急需新的治疗方案来打破这一困境。
近年来，免疫治疗的出现为癌症治疗带来了新希望，其中，针对程序性细胞死亡蛋白 1（PD-1）的免疫疗法备受瞩目。PD-1 抑制剂通过阻断 PD-1 受体与配体的相互作用，增强 T 细胞的抗肿瘤活性，从而发挥抗癌作用。纳武利尤单抗（nivolumab）作为一种 PD-1 免疫检查点抑制剂（ICI），在 ATTRACTION-3 试验中，展现出相较于紫杉烷类药物治疗不可切除的晚期或复发性 ESCC 的优势。然而，现实却不尽如人意，只有约 20% 的患者对这种 PD-1 单克隆抗体治疗有响应（完全缓解和部分缓解），这意味着大部分患者无法从中获益。因此，寻找能够预测哪些患者能从 PD-1 阻断治疗中获益的生物标志物，成为了癌症研究领域亟待解决的重要问题。
为了攻克这一难题，来自大阪大学临床研究组 15 家机构的研究人员挺身而出，开展了一项大规模的多中心研究，并将研究成果发表在《Esophagus》杂志上。他们深入探究了不可切除 / 复发性 ESCC 患者接受纳武利尤单抗治疗时，疗效和生存的预测生物标志物。研究发现，CD8+和 CCR8+细胞计数、CD8/Foxp3 和 CD8/CCR8 比值以及三级淋巴结构（TLS）密度，都有可能成为预测 PD-1 阻断治疗疗效和患者生存情况的生物标志物。这一发现意义重大，为未来开发针对 ESCC 患者的个性化治疗策略提供了关键依据，有望让更多患者得到更精准有效的治疗。
研究人员为开展此项研究，采用了多种关键技术方法。他们收集了 250 例接受纳武利尤单抗二线或更后线治疗的不可切除 / 复发性 ESCC 患者的样本，这些样本包括手术标本和治疗前的内镜活检组织。运用苏木精 - 伊红（H&E）染色和免疫组织化学（IHC）技术，对样本中的肿瘤浸润 T 淋巴细胞（TILs）和三级淋巴结构（TLS）密度进行评估。通过特定的图像分析软件（HALO 软件），对染色后的样本进行数字化分析，从而精准地识别和量化染色细胞。
患者背景和纳武利尤单抗治疗结果
研究共纳入 250 名患者，其中男性占 77.2%，ICI 治疗开始时的中位年龄为 70 岁。患者均为 ESCC，近半数患者的东部肿瘤协作组体能状态评分（Eastern Cooperative Oncology Group PS）为 0。52.4% 的患者为不可切除的晚期 ESCC，47.6% 为复发性疾病。所有患者都接受过系统抗癌治疗，部分还接受过手术或放疗。治疗后，客观缓解率为 14.4%，疾病控制率为 46.4%。
手术标本中 CD3+、CD8+和 Foxp3+淋巴细胞计数与纳武利尤单抗治疗响应的关系
在 129 例有手术标本的患者中，84.5% 对治疗无响应，15.5% 有响应。分析发现，CD8+淋巴细胞数量可预测对纳武利尤单抗的响应情况，CD8/Foxp3 比值与治疗响应显著相关，而 CD3+淋巴细胞计数与治疗响应无关，Foxp3+淋巴细胞数量与治疗响应存在一定关联趋势。
手术标本中患者生存与 CD3+、CD8+和 Foxp3+淋巴细胞计数的关系
对手术标本队列进行生存分析，发现高 CD8+计数和高 CD8/Foxp3 比值与更好的无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）相关，而 CD3+和 Foxp3+计数与 OS 无显著相关性。
手术标本中 TLS 密度与患者生存和纳武利尤单抗治疗响应的关系
手术标本中，TLS 密度可预测对纳武利尤单抗的治疗响应。高 TLS 密度与更好的 PFS 和 OS 相关。将患者按 TLS 密度和 CD8/Foxp3 比值分组后发现，高 TLS 密度 / 高 CD8/Foxp3 比值组的响应率最高。
内镜活检标本中 CD3+、CD8+、Foxp3+和 CCR8+淋巴细胞计数与纳武利尤单抗治疗响应和生存的关系
在 121 例可评估的内镜活检患者中，86.8% 无响应，23.2% 有响应。CD8+和 CCR8+淋巴细胞计数与治疗响应显著相关，CD8/Foxp3 和 CD8/CCR8 比值也与治疗响应显著相关。高 CD8/CCR8 比值与更好的 PFS 和 OS 相关。
根据手术标本和内镜活检数据对患者生存和纳武利尤单抗治疗响应的单因素和多因素分析
单因素分析显示，手术标本数据中，OS 与多个因素相关；多因素分析确定 CD8/Foxp3 比值和 TLS 密度是独立预后参数。内镜活检数据中，PFS 与多个因素相关，多因素分析确定 CD8/CCR8 比值是独立预后参数。
在讨论部分，研究人员进一步阐释了这些生物标志物的意义。在手术标本中，CD8+细胞计数、CD8/Foxp3 比值和 TLS 密度在预测治疗疗效和患者预后方面表现出色，其中 CD8/Foxp3 比值和 TLS 密度更是被确定为独立预后因素。在活检标本中，CD8+和 CCR8+细胞以及 CD8/Foxp3 和 CD8/CCR8 比值能够有效预测治疗疗效，CD8/CCR8 比值还是重要的预后参数。
这项研究首次运用自动化细胞计数系统 HALO 客观评估 IHC 结果，大大提升了病理评估的客观性、精准性和说服力。同时，研究还发现效应调节性 T 细胞（Tregs）在 ESCC 的 ICI 治疗响应中发挥着重要作用，CCR8 作为效应 Tregs 的标志物，其表达与治疗疗效密切相关。此外，TLS 密度也被证实是 ICIs 预后和治疗效果的独立预测指标，对指导食管癌术后辅助纳武利尤单抗治疗具有重要意义。
当然，这项研究也存在一些局限性。研究采用回顾性设计，治疗方式和患者随访计划在不同机构和医生之间缺乏严格标准化。活检和手术标本之间存在差异，可能受到免疫染色异质性、IHC 评估方法不同以及手术标本中肿瘤边缘定义困难等因素影响。而且研究未深入探讨 PD-L1 表达的临床意义。但尽管如此，CD8 始终是活检和手术标本中 ICI 疗效的重要生物标志物，充分证明了评估细胞毒性 T 细胞在预测 ICI 疗效方面的重要价值。
总的来说，这项多中心生物标志物研究利用 HALO 软件，对大量不可切除或复发性 ESCC 患者进行客观评估，为 ESCC 患者 ICI 治疗的生物标志物研究提供了重要依据。虽然这些发现还需要在独立队列样本中进一步验证，但将这些生物标志物结合起来开发评分系统，有望为 ESCC 患者建立个性化治疗策略，为食管癌的治疗开辟新的道路，让更多患者从中受益。
