综述：利用CRISPR-Cas增强型等温扩增技术快速鉴定 livestock 病原体

（编辑推荐）本综述系统阐述了CRISPR-Cas（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-CRISPR-associated protein）与等温扩增技术联用在 livestock 病原体诊断中的突破性进展，该技术兼具高灵敏度、短检测时间（sample-to-answer）和低成本优势，为 zoonotic 病原体的现场检测（point-of-care）提供了创新解决方案。

　　

Abstract
病原体快速精准诊断是 livestock 疾病防控的核心挑战。传统核酸检测方法虽敏感特异，但依赖昂贵设备（如PCR仪）和专业操作。CRISPR-Cas系统作为原核生物"适应性免疫"机制，经改造后展现出非凡的核酸识别能力——其Cas¹²/Cas¹³效应蛋白可特异性切割靶序列，并触发荧光信号报告系统。

Graphical Abstract
当等温扩增技术（如LAMP/RPA）与CRISPR-Cas联用时，形成"1+1>2"的协同效应：前者在恒温条件下指数级扩增病原体DNA/RNA，后者则像分子探针般精准识别扩增产物。这种组合将检测限推进至aM级（10^-18M），且反应全程可在便携式加热块完成，彻底摆脱对Thermal Cycler的依赖。

技术优势
• 速度革命：埃博拉病毒检测时间从4小时压缩至30分钟
• 成本突破：试剂成本仅为qPCR的1/5
• 可视化读值：侧流层析试纸条（LFD）实现裸眼判读
• 多重检测：通过设计不同crRNA可同步筛查多种病原体

应用场景
在非洲猪瘟（ASFV）监测中，该技术展现出90%以上符合率；针对禽流感病毒（AIV-H5N1）的野外检测中，其灵敏度比ELISA高3个数量级。值得注意的是，Cas¹³系统对RNA病毒（如口蹄疫病毒）的直接检测能力，规避了反转录步骤带来的误差累积。

挑战与展望
尽管存在crRNA脱靶风险，但新型高保真Cas变体（如Cas^12f1）的发现提供了优化路径。未来与微流控芯片的整合，或将实现"样本进-结果出"的全自动化诊断范式，为One Health战略提供关键技术支撑。