构建多功能敲入小鼠模型：揭秘生殖颗粒在 RNA 稳态与生殖系发育中的相分离机制

生殖颗粒（germ granules）在生殖细胞分化和成熟中作用关键，但其成分和功能机制尚不明确。研究人员构建了一种多功能生殖系小鼠模型，通过标记 DDX4，优化生殖颗粒纯化流程并明确其成分。该研究为生殖系研究提供新模型，揭示生殖颗粒调控生殖系发育的机制。

　　摘要：大量带有表位标签且表达 Cre/CreERT2 的小鼠模型可用于研究生殖颗粒（germ granules）和生殖系发育。生殖颗粒是一种无膜的蛋白质细胞器（MLO），参与生殖细胞的分化和成熟。然而，其蛋白质和 RNA 转录本成分，以及功能机制仍未完全明晰。在此，研究人员通过组合标记 DDX4，构建了一种通用的生殖系小鼠模型，使得在内源性 Ddx4 启动子的控制下，能够同时表达三种顺反子编码产物（C 端标记的 DDX4 - DDX4^5HA、增强型绿色荧光蛋白 EGFP 和可诱导的重组酶 CreERT2）。利用高亲和力的 HA 标签，研究人员优化了从精子细胞中纯化生殖颗粒（染色质小体，CB）的高效流程，并对其蛋白质和 RNA 转录本组成进行了表征。此外，研究人员探索并确定，DDX4 介导的、依赖相分离的 CB 完整性，对于招募特定的长 RNA 转录本，以及粗线期和睾丸特异性（TE）来源的 piRNA 的生物合成具有重要功能。总之，该研究构建了一种具有多种应用的通用生殖系小鼠模型，为生殖系研究提供了新工具，并揭示了生殖颗粒在生殖系发育中的作用机制。