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青少年粒单核细胞白血病（JMML）是一种严重威胁婴幼儿和儿童健康的血液恶性肿瘤，造血干细胞移植（HSCT）后复发率高。研究人员开展了针对 JMML 的 CLL-1 靶向细胞免疫疗法研究，发现 CLL-1 在 JMML 细胞表面高表达，CLL1CART 在体内外均有抗白血病活性，为 JMML 治疗提供新方向。
青少年粒单核细胞白血病（JMML）是一种好发于婴幼儿和儿童的髓系增殖性疾病，如同隐藏在孩子们身体里的 “恶魔”，严重威胁着他们的健康和生命。目前，造血干细胞移植（HSCT）是 JMML 的标准治疗方案，但令人头疼的是，移植后的复发情况十分常见，这让许多患儿和家庭陷入困境。在这样的背景下，开发创新疗法迫在眉睫。
为了攻克这一难题，来自美国加利福尼亚大学旧金山分校等多个研究机构的研究人员展开了深入研究。他们发现，C 型凝集素样分子 - 1（CLL-1，由 CLEC12A 编码 ）在 JMML 患者的细胞表面存在过表达现象。基于这一发现，研究人员开发了针对 CLL-1 的嵌合抗原受体 T 细胞（CLL1CART）免疫疗法，并进行了一系列临床前测试。研究结果令人振奋，CLL1CART 在体外和体内都展现出了强大的抗白血病活性，能够有效减少白血病干细胞的数量，降低白血病细胞的连续移植能力。这一研究成果发表在《Nature Communications》上，为 JMML 的治疗带来了新的曙光。
在研究过程中，研究人员运用了多种关键技术方法。首先是高通量测序技术，通过对 85 例原发性样本进行批量 RNA 测序（bulk RNAseq） ，以及对 22 例 JMML 单核细胞（MNCs）样本进行单细胞 RNA 测序（scRNAseq），全面分析基因表达情况。其次是质谱分析技术，对 JMML CD34+细胞和健康供体的 CD34 造血干细胞进行质谱分析，鉴定蛋白质表达差异。此外，还利用了流式细胞术，对患者样本中的细胞进行检测，验证 CLL-1 的表达情况 。这些技术相辅相成，为研究的顺利开展提供了有力支持。
研究结果主要体现在以下几个方面：
- CLL-1 在 JMML MNCs 上上调：研究人员通过批量 RNAseq 分析，筛选出 1500 种在转录水平表达的表面蛋白，经过一系列筛选，最终确定 CLL-1 为潜在治疗靶点，且其在不同甲基化组中均呈上调状态。
- CLL-1 可在 JMML LSCs 上过表达：利用 scRNAseq 和质谱分析，研究发现 CLL-1 在 JMML 的造血干细胞和祖细胞（HSPCs），如造血干细胞（HSCs）和粒单核祖细胞（GMPs）中过表达。同时，还发现多个与免疫相关的蛋白也存在表达差异。
- 流式细胞术验证 CLL-1 在 JMML 中的过表达：通过流式细胞术检测，发现 CLL-1 主要在单核细胞和粒细胞上表达，且在 JMML 患者的 MNCs 群体中，CLL-1 的表达水平显著高于健康对照组，不过在正常造血干细胞（HSCs）上表达较低。
- CLL1CART 在体外具有抗 JMML 活性：研究人员构建了四种第二代慢病毒 CLL1CART，并在体外进行测试。结果显示，含有 CD8α 铰链区（H）和跨膜结构域（TM）以及 4-1BB 共刺激结构域的 CLL1CART 表现出最强的抗白血病活性，能够有效杀伤原发性 JMML 细胞。
- T 细胞受体 α 链恒定区（TRAC）敲除降低对原发性 JMML 细胞的同种异体反应性：利用 CRISPR/Cas9 基因编辑技术敲除 TRAC 基因，发现能够降低 T 细胞受体（TCR）介导的同种异体反应性，减少非特异性细胞毒性。
- 优化的 TRAC-KO CLL1CART 免疫疗法在体内抑制 JMML 增殖：在两种 JMML 患者来源的异种移植（PDX）模型中，优化的 TRAC-KO CLL1CART 免疫疗法显著降低了白血病负担，减少了白血病干细胞数量，延长了小鼠生存时间。
- CLL1CART 有效减少 JMML LSCs 和连续移植能力：研究表明，CLL1CART 能够减少 JMML 白血病干细胞，降低其连续移植能力，进一步证明了该疗法的有效性。
在结论和讨论部分，研究人员指出，他们通过综合的转录组和表面组学方法，确定 CLL-1 是 JMML 细胞免疫治疗的有前景的靶点，CLL1CART 在体内外均展现出强大的抗白血病活性。这一研究为那些无法接受标准异体 HSCT 或移植后复发的 JMML 患者提供了一种潜在的新治疗方法。尽管研究存在一些局限性，如 CLL-1 在所有患者样本中并非均一表达，且 CLL1CART 无法完全根除 JMML，但这并不影响该研究的重要意义。未来，可以进一步探索双抗原靶向、IL-15 共表达等策略，或者将 CLL1CART 与其他常用治疗方法联合使用，有望进一步提高治疗效果。总之，这项研究为 JMML 的治疗开辟了新的道路，为众多患者带来了新的希望 。
