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肝细胞癌（HCC）早期诊断困难，现有生物标志物如 AFP 敏感性有限。研究人员开发新型半巢式 RT-PCR 检测法量化循环铜蓝蛋白（CP）mRNA。结果显示 HCC 组 CP mRNA 水平更高，该检测法有诊断价值，或为 HCC 诊断带来新突破。
在癌症的世界里，肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是一个极其危险的 “杀手”。它是全球第六大常见癌症 ，也是癌症相关死亡的第三大主因。对于 HCC 来说，早期发现就像是抓住了 “救命稻草”，是有效治疗的关键。然而，目前的诊断方法却存在诸多问题。像超声（US）、CT 扫描、MRI 这些成像技术，要么依赖医生的技术水平，要么成本较高，对于大规模的高危人群筛查并不友好。而血液检测中的甲胎蛋白（Alpha-Fetoprotein，AFP）和维生素 K 缺乏或拮抗剂 Ⅱ 诱导蛋白（PIVKA II ）等生物标志物，虽然在一定程度上能辅助诊断，但它们的敏感性有限，常常会出现 “漏网之鱼”，导致很多患者错过最佳治疗时机。
为了攻克这些难题，越南军事医学大学 103 军事医院等机构的研究人员踏上了探索之路。他们开展了一项旨在开发并验证一种测量原发性 HCC 患者外周血中无细胞铜蓝蛋白（Ceruloplasmin，CP）mRNA 水平新方法的研究。最终发现，通过新型半巢式逆转录聚合酶链反应（semi-nested RT-PCR）联合 DNA 熔解分析的方法，能够精准量化 CP mRNA。并且，HCC 患者的 CP mRNA 水平显著高于慢性肝病（CLD）患者和健康对照者，这表明 CP mRNA 有望成为 HCC 早期检测的重要生物标志物。该研究成果发表在《Scientific Reports》上，为 HCC 的诊断带来了新的曙光。
研究人员在研究过程中，主要运用了以下关键技术方法：一是样本采集与处理，从 103 名参与者（包括 51 名 HCC 患者、21 名慢性肝病患者和 31 名健康供体）采集静脉血，分离血浆并提取 RNA ；二是采用半巢式 RT-PCR 方法，对血浆样本中的 CP 基因循环 mRNA 进行扩增和定量，同时引入非人类内参基因（IC）进行标准化和质量控制；三是利用 DNA 熔解曲线分析确定 PCR 产物的熔解温度峰值，从而实现对 CP mRNA 的精准定量；四是运用 MedCalc 软件进行数据分析，通过多种统计方法评估检测方法的诊断性能。
研究结果
- 研究人群特征：研究共纳入 103 名参与者，分为 HCC 组、CLD 组和健康供体（HD）组。HCC 组患者年龄显著高于其他两组，男性居多。HCC 组的谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平明显更高，肝硬化和乙肝病毒（HBV）感染等风险因素更为普遍12。
- RT-PCR 检测方法概述：新开发的定量 RT-PCR 检测方法通过两轮扩增（半巢式），提高了检测的灵敏度和特异性。第一轮同时扩增 CP mRNA 和 IC 基因，第二轮使用通用反向引物和特异性正向引物，最后通过 DNA 熔解曲线分析区分 CP mRNA 和 IC 的峰值，根据峰值高度比来量化 CP mRNA 水平34。
- 循环 CP mRNA 对 HCC 的诊断性能：该检测方法具有可接受的重复性和准确性，变异系数（CV）为 28.21%。HCC 组的 CP mRNA 水平显著高于 CLD 组和 HD 组。通过受试者工作特征曲线（ROC）分析，该检测方法在区分 HCC 与非 HCC 情况时表现出良好的特异性，尤其在区分 HCC 与慢性肝病方面优势明显。此外，CP mRNA 水平在不同 HCC 分期中呈现出随病情进展而升高的趋势，虽部分阶段差异无统计学意义，但仍显示出其在监测疾病进展方面的潜力567。
- CP mRNA 与 AFP 的诊断性能比较：与 AFP 相比，CP mRNA 在检测早期 HCC 时具有更好的敏感性。在 AFP 水平低于 20 ng/mL 的 HCC 患者中，59.1% 的患者 CP mRNA 水平升高，表明 CP mRNA 可作为 AFP 的补充生物标志物，提高早期 HCC 的检测率89。
研究结论与讨论
这项研究成功建立了一种新型半巢式 RT-PCR 检测方法，用于量化外周血中的循环 CP mRNA，为 HCC 的检测提供了一种潜在的非侵入性生物标志物。该方法能够检测出相当一部分 AFP 水平低于 20 ng/mL 的 HCC 患者，弥补了 AFP 在早期诊断中的不足。不过，由于该研究是回顾性设计，这些结果仍具有探索性。未来需要更大规模的前瞻性队列研究来进一步验证其临床适用性，以便将其更好地整合到常规临床实践中，为 HCC 患者带来更多的生存希望。这一研究成果为 HCC 的早期诊断和治疗开辟了新的方向，有望推动肝癌诊疗领域的重大进步。
