利用甲氨蝶呤诱导的免疫原性细胞裂解物控制侵袭性4T1-luc转移性乳腺癌

针对转移性乳腺癌预后差、免疫抑制微环境难突破的难题，巴西利亚大学团队创新性利用甲氨蝶呤(MTX)和顺铂(CIS)诱导4T1-luc细胞产生免疫原性裂解物，通过皮下免疫成功抑制原发肿瘤生长和肺转移，显著提升CD4+效应T细胞比例并逆转免疫抑制表型。该研究为化疗药物免疫调节功能再定位提供了新证据，发表于《Biomedicine》。

　　

转移性乳腺癌治疗领域长期面临"冷肿瘤"免疫原性不足的困境，5年生存率仅28%的残酷数据催生了对新型免疫疗法的迫切需求。传统化疗药物甲氨蝶呤(MTX)在临床使用数十年后，其诱导免疫原性细胞死亡(ICD)的潜能首次被巴西利亚大学团队揭示，这项发表于《Biomedicine》的研究为化疗药物老药新用开辟了全新路径。

研究人员构建了表达荧光素酶的4T1-luc小鼠乳腺癌模型，这种高度侵袭性模型能自发形成肺转移灶，完美模拟临床IV期乳腺癌特征。通过生物发光成像技术动态监测，团队发现经MTX处理的肿瘤细胞裂解物免疫组在原发灶控制方面表现尤为突出——较对照组肿瘤重量降低12倍，更令人振奋的是第4周时肺转移灶出现显著消退。这种治疗效应伴随着脾肿大改善和肝脏髓外造血减少，提示系统性免疫抑制状态的逆转。

关键技术包括：1) 用100 μM CIS或1.5 μM MTX处理4T1-luc细胞24小时制备免疫原性裂解物；2) BALB/c小鼠皮下接种4×10⁵个4T1-luc细胞建立转移模型；3) 每周免疫干预后采用IVIS Lumina XR系统进行生物发光定量；4) 流式细胞术分析脾脏CD4⁺/CD8⁺ T细胞亚群及MDSCs(髓系来源抑制细胞)；5) ELISA检测血清IL-6和IFN-γ水平。

3. 结果与讨论
原发与转移灶控制
MTX裂解物免疫使原发肿瘤生物发光信号降低82%，肺转移灶在第28天显著消退。值得注意的是，这种远端效应提示产生了系统性抗肿瘤免疫应答，这在传统化疗中极为罕见。

器官病理改变
免疫组脾脏重量恢复近正常水平(P<0.0001)，肝脏髓外造血灶减少，证实该疗法可逆转肿瘤诱导的造血系统异常。这种改变与IL-6水平回升(P<0.05)和IFN-γ恢复正相关，揭示Th1型免疫应答的重建。

免疫细胞重塑
流式数据显示MTX组CD4⁺效应T细胞占比提升3.5倍(P<0.01)，而CD8⁺ T细胞亚群变化不显著。这种选择性调控提示MTX裂解物可能通过MHC II类分子途径优先激活CD4⁺ T细胞，后者通过"许可证"机制增强CTL(细胞毒性T细胞)功能。

机制探讨
与传统认知不同，该研究揭示MTX诱导的ICD可能通过以下途径发挥作用：1) 释放高迁移率族蛋白B1(HMGB1)等DAMPs(损伤相关分子模式)激活树突状细胞；2) 增加肿瘤新抗原的MHC II类分子递呈；3) 减少Treg(调节性T细胞)比例(P<0.05)。这种多靶点作用使其克服了单一免疫检查点抑制剂的局限性。

4. 结论
Báo S?nia Nair团队首次证实MTX可作为ICD诱导剂，其产生的肿瘤裂解物通过重塑CD4⁺ T细胞应答谱，在恶性度极高的4T1-luc模型中实现原发灶和转移灶的双重控制。该发现不仅为MTX的临床再定位提供理论依据，更开创了"化疗-免疫"协同治疗的新范式。特别值得注意的是，这种裂解物制备方案规避了化疗药物直接使用的毒副作用，具有显著的临床转化潜力。未来研究可进一步解析MTX特异性诱导的抗原谱，以及与其他免疫疗法的联合应用策略。