LAMA4+ CD90+ eCAFs通过诱导CD8+ T细胞衰老构建肝癌免疫抑制微环境的机制研究

本研究揭示了肝癌微环境中LAMA4+ CD90+ eCAFs（细胞外基质癌相关成纤维细胞）通过ITGA6介导的DNA损伤信号通路诱导CD8+ T细胞衰老的新机制。研究人员整合单细胞RNA测序和空间转录组技术，发现远端分布的CD90+ eCAFs通过分泌LAMA4抑制T细胞功能，靶向LAMA4可协同增强抗PD-1疗法效果，为肝癌免疫治疗提供新靶点。

　　

肝癌作为全球第三大癌症相关死亡原因，其治疗面临巨大挑战。尽管免疫检查点阻断(ICB)疗法在多种肿瘤中取得突破，但对肝癌患者的响应率仍不理想。这种治疗困境与肝癌独特的免疫抑制微环境密切相关——作为代谢核心器官，肝脏具有天然的免疫耐受特性，富含免疫抑制性细胞因子如IL-10和TGF-β。更关键的是，癌症相关成纤维细胞(CAFs)在肝癌微环境中异常活跃，但其异质性及与免疫细胞的互作机制尚未阐明。

广州医科大学附属肿瘤医院的研究团队通过整合多组学技术和功能实验，首次揭示了LAMA4⁺ CD90⁺ eCAFs亚群通过诱导CD8⁺ T细胞衰老促进免疫逃逸的新机制。这项发表于《Cell Communication and Signaling》的研究不仅解析了CAFs的空间分布特征，还发现靶向LAMA4可逆转T细胞功能障碍，为改善肝癌免疫治疗提供了理论依据。

研究采用单细胞RNA测序(scRNA-seq)分析5种肝癌类型（包括肝细胞癌、胆管癌和结直肠癌肝转移等）的细胞图谱，结合空间转录组(ST)技术定位细胞空间分布。通过DEN/CCL₄诱导的自发性小鼠肝癌模型，分离CD90⁺ eCAFs与CD8⁺ T细胞进行共培养实验。采用siRNA敲降、His-pulldown质谱、流式细胞术等技术验证分子机制，并评估靶向LAMA4与抗PD-1联合治疗的效果。

Characterization of CAF subtypes in human liver cancers
研究人员对5种肝癌的CAFs进行无监督聚类，鉴定出5个功能各异的亚群：细胞外基质CAFs(eCAFs)、炎症性CAFs(iCAFs)、肌成纤维样CAFs(myCAFs)、血管相关CAFs(vCAFs)和抗原呈递CAFs(apCAFs)。其中eCAFs特异性高表达CD90和LAMA4，空间分析显示其分布于肿瘤边缘，与CD8⁺ T细胞空间位置重叠。

CD90⁺eCAFs mediate CD8⁺T cell suppression
在自发性小鼠肝癌模型中，从肿瘤组织分离的CD90⁺ eCAFs与脾源性CD8⁺ T细胞共培养后，显著抑制了T细胞的毒性标志物GZMB和穿孔素的表达，并降低其对Hepa1-6肝癌细胞的杀伤能力。

LAMA4 inhibits CD8⁺T cell function through the receptor ITGA6
His-pulldown联合质谱分析发现LAMA4与T细胞表面受体ITGA6结合。预中和ITGA6可逆转eCAFs对CD8⁺ T细胞增殖和功能的抑制，证实ITGA6是LAMA4的关键作用靶点。

LAMA4 induces CD8⁺T cells immunosuppressive by triggering T cell senescence
RNA-seq和磷酸化蛋白质组学显示，LAMA4通过ITGA6激活ATM-CHK2-H2AX DNA损伤信号通路，上调p53/p16/p21等衰老标志物，诱导CD8⁺ T细胞进入衰老状态。ATM抑制剂KU-55933可阻断这一过程。

Targeting LAMA4 blocks the progression of hepatocellular carcinoma
在自发性肝癌模型中，胆固醇修饰的siLAMA4显著减少肿瘤数量和体积，提高肿瘤内Ki67⁺ CD8⁺ T细胞比例。联合抗PD-1治疗显示协同效应，肿瘤抑制效果优于单药治疗。

这项研究首次系统解析了肝癌CAFs的异质性，阐明CD90⁺ eCAFs通过LAMA4-ITGA6轴诱导T细胞衰老的分子机制，突破性地提出靶向CAFs可重塑免疫微环境。临床前实验证实，LAMA4抑制剂与ICB的联合策略具有转化潜力，为克服肝癌免疫治疗耐药提供了新思路。该发现不仅适用于原发性肝癌，对结直肠癌肝转移等继发性肝癌同样具有指导意义。未来需要进一步优化LAMA4靶向递送系统，并探索其他CAFs亚群在免疫调节中的作用。