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2023 年不丹急性出血性结膜炎（AHC）爆发，初期病原体未明确。研究人员分析 18 例临床样本，发现结膜样本检测病原体更可靠，并鉴定出柯萨奇病毒 A24 变异株（CVA24v）基因型 IV 新毒株，为防控 AHC 提供关键依据。
在全球的传染病舞台上，急性出血性结膜炎（Acute Hemorrhagic Conjunctivitis，AHC），也就是大家俗称的 “红眼病”，一直是个让人头疼的角色。它能在人群中迅速传播，不分年龄和社会阶层，给人们的眼部健康带来不小的威胁。AHC 通常在感染后 2 天内发病，眼睛会突然变得又红又肿、疼痛难忍，还会出现结膜下出血、流泪增多等症状，部分患者甚至还伴有耳前淋巴结肿大。
自 1969 年在加纳首次被记录以来，AHC 就开始在全球 “兴风作浪”。柯萨奇病毒 A24 变异株（Coxsackievirus A24 variant，CVA24v）和肠道病毒 70（Enterovirus 70，EV70）是导致 AHC 的两大主要病原体，此外，还有一些其他肠道病毒和人类腺病毒也可能引发这种疾病。CVA24v 自 1970 年在新加坡首次被发现后，就开始在世界各地传播，引发了多次大规模的 AHC 疫情。
近几十年来，南亚和东南亚地区频繁报告 AHC 疫情。这些疫情往往突然爆发，传播迅速，但通常具有自限性，不会在更广泛的人群中造成大规模扩散。然而，2023 年的情况却有所不同。这一年，越南、印度、加纳、巴基斯坦等多个国家都出现了 AHC 疫情，其中印度和巴基斯坦的主要病原体被确定为 CVA24v。与此同时，不丹也遭遇了 AHC 疫情的冲击，2023 年 6 月至 10 月期间，报告病例近 10,264 例，受影响地区学校暑假后重新开学可能加剧了疫情的传播。
在不丹，以往对结膜炎疫情病原体的诊断能力较为有限。2023 年疫情爆发时，为了查明病原体，不丹皇家疾病控制中心（Royal Centre for Disease Control，RCDC）向泰国曼谷的沃尔特?里德陆军研究所 - 武装部队医学科学研究所（Walter Reed Army Institute of Research-Armed Forces Research Institute of Medical Sciences，WRAIR-AFRIMS）寻求帮助。来自这些机构的研究人员开展了一项研究，旨在通过先进的病原体检测技术，确定此次疫情的病原体，并为未来的公共卫生应对提供重要信息。
研究人员采用了多种关键技术方法。首先是标本采集，他们从 9 名患者身上采集了 18 份配对样本（9 份结膜拭子和 9 份咽 / 鼻拭子）。接着进行核酸提取，从标本中提取总核酸。然后运用多重实时逆转录聚合酶链反应（multiplex real-time RT-PCR），使用 Fast-Track Respiratory 21（FTD21）检测试剂盒初步检测病原体。此外，还进行了基于杂交捕获的下一代测序（Next Generation Sequencing，NGS），对病原体进行进一步确认和基因分析 。
研究结果如下：
- 疫情流行病学调查：2023 年 6 月至 10 月，不丹共经历了 60 起 AHC 疫情，涉及全国 20 个区中的 15 个区，报告病例总数达 10,444 例。Sarpang 区报告的病例数最多，Lhuntse 和 Haa 区最少。疫情最早于 2023 年 6 月 20 日在与印度接壤的 Samtse 的 Pugli 小镇被发现，之后在 Phuntsholing 等地出现大规模爆发。疫情呈现出间歇性、地理分散的特点，症状以眼部瘙痒、结膜充血为主，部分患者伴有其他症状。
- 病原体的检测与鉴定：通过 FTD21 多重实时 RT-PCR 检测，在 18 份标本中的 10 份（7 份结膜标本和 3 份咽 / 鼻标本）检测到了人类腺病毒（HAdV）、人类博卡病毒（HBoV）、人类鼻病毒（HRV）、肠道病毒（EV）和甲型流感病毒（Flu A）。而 NGS 分析显示，在 17 份标本中的 9 份（6 份结膜标本和 3 份咽 / 鼻标本）检测到了 CVA24v，且未检测到其他病原体的基因组序列。两种检测方法存在部分不一致的结果。
- 病毒基因组特征分析：研究获得了 8 个完整的 CVA24v 基因组序列和 1 个部分基因组序列，并提交到 GenBank 数据库。这些序列被鉴定为 CVA24v 基因型 IV，与 2023 年来自中国、印度、巴基斯坦的序列相似性高。系统发育分析表明，2023 年的 CVA24v 基因型 IV 菌株形成了一个新的谱系，与 2002 - 2017 年的菌株存在明显的遗传差异，还发现了 19 个独特的氨基酸替换。
研究结论和讨论部分指出，2023 年不丹 AHC 疫情的爆发与以往趋势不同，疫情更为严重且传播范围更广。研究表明，结膜样本在检测 AHC 病原体方面比咽 / 鼻拭子更可靠。同时，CVA24v 基因型 IV 新毒株的出现，以及其携带的新突变，可能是导致疾病重新出现和高传播率的原因。但由于分析的局限性和缺乏更多临床数据，目前还无法确定这些突变与疾病严重程度的关系。
这项研究的意义重大。它揭示了不丹近期 AHC 疫情的病原体情况，强调了基因组测序在监测和理解传染病传播中的重要性。研究结果为不丹未来预防和控制 AHC 疫情提供了关键依据，也凸显了国际合作在应对公共卫生挑战中的重要性和有效性。不过，该研究也存在一定的局限性，如缺乏个体病例的临床数据，样本采集的地理范围有限等。后续研究应进一步探究检测到的突变的功能后果，并制定预防和管理未来疫情的策略。
