靶向 METTL16：急性髓系白血病（AML）治疗新希望 —— 调控 TCF-1 助力 CAR-T 细胞抗癌

急性髓系白血病（AML）治疗面临困境，5 年生存率不足 30% ，CAR-T 细胞疗法也存在局限。研究人员探究 METTL16 在 AML 中的作用，发现其高表达与患者预后差相关，抑制它可促进 CAR-T 细胞功能。这为 AML 治疗提供新方向。

　　急性髓系白血病（AML）是常见的血液恶性肿瘤，如同隐藏在血液中的 “恶魔”，在成人中高发，严重威胁着患者的生命健康。尽管医学在不断进步，可 AML 患者的 5 年总生存率依旧低于 30%。目前，嵌合抗原受体 T 细胞（CAR-T）疗法在部分血液肿瘤治疗中初露锋芒，给患者带来了新希望，但在 AML 治疗中，它却面临着诸多挑战，像危及生命的毒性反应、CAR-T 细胞持久性有限以及患者个体间和个体内的差异等问题，都极大地限制了治疗效果。

在这样的背景下，山西省妇幼保健院的研究人员决定深入探索 AML 治疗的新路径，他们将目光聚焦在了甲基转移酶 16（METTL16）上。此前研究虽发现 METTL16 在多种癌症包括白血病中起癌基因作用，但它在 AML 中的具体机制却鲜为人知。于是，研究人员开展了一系列研究，试图揭开 METTL16 在 AML 中的神秘面纱。

经过深入研究，研究人员发现了一系列重要结论。在 AML 患者中，METTL16 呈现高表达状态，而且高水平的 METTL16 与患者不良预后密切相关。功能实验表明，敲除 METTL16 能够促进 CAR-T 细胞的增殖、增强其持久性和肿瘤杀伤能力，还能促进 CAR-T 细胞向 TCF-1 前体耗竭 T 细胞（T_PEX）分化。进一步研究发现，METTL16 能够介导 T 细胞因子 1（TCF-1）的 m6A 修饰，抑制其 mRNA 表达和稳定性，而 TCF-1 的缺失会促进 T 细胞耗竭，抑制其自我更新能力 。这一系列发现揭示了靶向 METTL16 或许能成为激活 AML 抗肿瘤免疫的有效策略，为 AML 的治疗开辟了新方向，犹如在黑暗中为患者点亮了一盏明灯。该研究成果发表在《Clinical and Experimental Medicine》杂志上。

为开展此项研究，研究人员运用了多种关键技术方法。首先，收集了 62 例 AML 患者和 36 例健康对照的骨髓样本；实验动物方面，使用了 METTL16 基因敲除（KO）、野生型（WT）和 CAR 转基因（CAR-Tg）小鼠。实验技术上，通过逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测 METTL16 和 TCF-1 的 mRNA 表达水平；采用 m6A 检测试剂盒测定 m6A 水平；利用甲基化 RNA 免疫沉淀（MeRIP）实验确定 TCF-1 转录本的 m6A 高甲基化情况；借助流式细胞术分析 CAR-T 细胞的功能 。

研究结果如下：

1. METTL16 在 AML 患者中过表达：生物信息学分析、RT-qPCR 检测和蛋白质表达分析均显示，AML 患者中 METTL16 的表达明显高于健康对照组。且 ROC 曲线分析表明，METTL16 mRNA 表达对 AML 患者预后具有预测价值，高表达预示着较差的临床结局。
2. METTL16 缺失促进 CAR-T 细胞在 AML 模型中的持久性：与 WT 组相比，METTL16 缺失促进了 CAR-T 细胞的增殖，显著增加了 CAR-T 细胞的数量，有助于 CAR-T 细胞的扩增和长期维持。
3. METTL16 缺失促进 CAR-T 细胞的回忆反应：METTL16 缺失使 CD44⁺CD62L^-T_EFF细胞比例在第 3 天显著增加，随后下降，同时 CD44⁺CD62L⁺记忆样细胞比例逐渐上升，还增加了 CD127⁺KLRG1^-细胞比例，降低了 CD127^-KLRG1⁺短寿效应细胞（SLECs）比例 ，并提高了 IL-2 和干扰素 γ（IFNγ）的表达，赋予 CAR-T 细胞记忆样特性。
4. 靶向 METTL16 增强 TCF-1⁺T_PEX CAR-T 细胞的形成：在 TCF-1⁺ CAR-T 细胞中，METTL16 缺失显著增加了 CD127⁺KLRG1^-记忆前体效应细胞（MPECs）的比例，促进了 TCF-1⁺T_PEX细胞的扩增并使其获得记忆样特性。
5. METTL16 介导的 TCF-1 的 m6A 修饰抑制其 mRNA 表达稳定性：通过在线数据库预测和实验验证，确定了 TCF-1 的 m6A 位点，发现 METTL16 主要结合于位点 6，其缺失显著增加了 TCF-1 的 mRNA 表达和稳定性。
6. METTL16 缺失以 TCF-1 依赖的方式促进 T_PEX的形成和持久性：敲除 METTL16 和 TCF-1 双基因（DKO）的实验表明，METTL16 缺失诱导的 CAR-T 细胞增加、CD127⁺KLRG1^-细胞比例上升等效应会被逆转，说明 METTL16 可能通过调节 TCF-1 促进 T_PEX细胞的持久性和扩增。

在研究结论和讨论部分，研究人员指出，METTL16 在 AML 患者中过表达，敲除 METTL16 可促进 CAR-T 细胞的维持和抗肿瘤免疫。METTL16 介导的 TCF-1 的 m6A 修饰抑制了 TCF-1 的表达，而 TCF-1 是 CAR-T 细胞功能的关键调节因子 。肿瘤微环境中 T 细胞耗竭会削弱抗肿瘤功能，METTL16 的缺失则可增强 CAR-T 细胞的持久性和回忆反应，增加免疫促进性 “前体耗竭” T 细胞的形成。此外，TCF-1 对维持 T 细胞的持久性和稳态至关重要，高表达的 TCF-1 赋予干细胞样 T 细胞自我更新能力，与 CAR-T 细胞的持久性和抗肿瘤免疫增强相关 。这项研究揭示了 METTL16 在 AML 中的重要作用机制，为 AML 的治疗提供了潜在的新靶点和新思路，有望推动 AML 治疗领域的进一步发展，为众多 AML 患者带来新的希望 。