盐酸安罗替尼对 Cal27 舌癌细胞免疫原性细胞死亡相关分子表达的影响：开拓舌癌治疗新方向

为探究盐酸安罗替尼（AL3818）对舌癌细胞免疫原性细胞死亡（ICD）相关分子表达的影响，研究人员以 Cal27 舌癌细胞为对象开展研究。结果发现 AL3818 能诱导 ICD，与紫杉醇（PTX）联用效果更佳，该研究为舌癌治疗提供新方向。

　　在医学领域，舌鳞状细胞癌（TSCC， commonly known as tongue cancer）作为口腔癌中极为常见的一种，其恶性程度高，侵袭和转移能力强，严重威胁患者生命健康。目前，手术、放疗和化疗是主要治疗手段，但化疗常因耐药性问题导致效果受限。近年来，免疫疗法为 TSCC 治疗带来新希望，免疫原性细胞死亡（ICD）概念备受关注。ICD 是指肿瘤细胞凋亡时释放免疫相关分子，增强机体抗肿瘤免疫反应，这些分子被称为损伤相关分子模式（DAMPs），如热休克蛋白 70（HSP70）、钙网蛋白（CRT）、高迁移率族蛋白 B1（HMGB1）和三磷酸腺苷（ATP）等，它们在激活免疫系统对抗肿瘤细胞过程中发挥关键作用。然而，并非所有化疗药物都能有效诱导 ICD。盐酸安罗替尼（AL3818）作为新型抗肿瘤药物，在多种癌症治疗中展现潜力，但其对 TSCC 的 ICD 诱导作用尚不明确。为解决这一问题，西南医科大学口腔医学院等机构的研究人员开展了相关研究，其成果发表在《Discover Oncology》杂志上。

研究人员采用了多种关键技术方法。首先，通过 CCK - 8 法测定 AL3818 和紫杉醇（PTX）对 Cal27 细胞的半数抑制浓度（IC50） ，确定后续实验药物浓度。接着，运用流式细胞术检测细胞凋亡率；利用免疫荧光和流式细胞术检测 CRT 和 HSP70 表达水平；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定 HMGB1 浓度；借助 ATP 发光检测试剂盒评估 ATP 水平；最后，使用蛋白质免疫印迹法（western blot）检测总 CRT、膜结合 CRT、p - PERK 和 p - elF2α 的相对表达水平。

研究结果如下：

1. 药物对细胞增殖的影响：通过 CCK - 8 实验计算抑制率并绘制曲线，结果显示，不同浓度的 AL3818 和 PTX 作用于 Cal27 细胞，随着作用时间延长，细胞增殖抑制率均升高。AL3818 在 24h、48h、72h 的 IC₅₀值分别为 6.254 μmol/L、4.432 μmol/L 和 3.118 μmol/L；PTX 在 24h、48h、72h 的 IC₅₀值分别为 1.718 μmol/L、1.054 μmol/L 和 0.686 μmol/L。这表明两种药物对 Cal27 细胞增殖均有抑制作用，且抑制效果与时间和浓度相关。
2. 药物对细胞凋亡的影响：经流式细胞术检测，AL3818、PTX 单独处理及二者联合处理 Cal27 细胞 24h 后，细胞凋亡率均显著高于对照组，且 AL3818 + PTX 组凋亡率最高，说明二者联合使用诱导细胞凋亡效果更显著，存在协同作用。
3. 药物对 ICD 相关分子表达的影响：免疫荧光和流式细胞术检测发现，药物处理组 CRT 和 HSP70 的荧光强度及阳性表达率均显著高于对照组，且 AL3818 + PTX 组增强最为明显；ELISA 检测显示，药物处理组 HMGB1 表达显著增加，AL3818 诱导 HMGB1 释放的能力可能强于 PTX；ATP 发光检测表明，药物处理组 ATP 释放显著增加，AL3818 + PTX 组释放量最高。这些结果表明 AL3818 和 PTX 可诱导 Cal27 细胞释放 ICD 相关分子，联合使用效果更佳。
4. CRT 暴露机制研究：western blot 检测结果显示，与对照组相比，AL3818 组细胞膜上 CRT 表达显著上调，且总 CRT 含量基本不变。同时，随着 p - PERK 和 p - elF2α 表达上调或下调，细胞膜上 CRT 表达呈现相同趋势，表明 AL3818 诱导 Cal27 细胞 ICD 过程中 CRT 暴露与 PERK/elF2α 信号通路的磷酸化密切相关。

研究结论与讨论部分指出，AL3818 可通过调节 ATP、CRT、HSP70 和 HMGB1 等 ICD 相关分子水平，诱导 Cal27 TSCC 细胞系发生 ICD，且与 PTX 联合使用诱导 ICD 的效果优于单一用药。AL3818 诱导 Cal27 细胞 ICD 过程中 CRT 从细胞内转移到细胞膜的过程，可能与 PERK/elF2α 信号通路的磷酸化激活有关。该研究表明 AL3818 在诱导 Cal27 细胞释放 ICD 相关 DAMPs 方面表现优异，甚至优于当前一线放化疗药物 PTX，且二者联合使用不存在相互抑制作用，这为部分对 PTX 不敏感的 TSCC 患者提供了新的治疗选择。同时，与其他可诱导 ICD 的物理方法相比，AL3818 作为靶向药物具有显著治疗效果和精准免疫靶向特性，为 TSCC 的临床治疗提供了坚实的理论基础，也为后续通过树突状细胞（DC）共培养和体内实验进一步验证其疗效奠定了初步理论依据。