骨弥漫大 B 细胞淋巴瘤免疫丰富微环境与卓越生存的探秘之旅

在血液肿瘤研究中，骨弥漫大 B 细胞淋巴瘤（bone - DLBCL）的免疫分子特征及生存关联尚不明确。研究人员对其开展研究，发现 PB - DLBCL 和多骨型 DLBCL 有相似特征，bone - DLBCL 具免疫丰富肿瘤微环境（TME）且生存更佳，为治疗提供新思路。

　　在血液肿瘤的世界里，弥漫大 B 细胞淋巴瘤（DLBCL）是一种常见且复杂的疾病。其中，骨弥漫大 B 细胞淋巴瘤（bone - DLBCL）作为 DLBCL 的罕见亚型，一直吸引着众多科研人员的目光。bone - DLBCL 可分为原发性骨 DLBCL（PB - DLBCL）、多骨型 DLBCL（polyostotic - DLBCL）和播散型骨 DLBCL 。以往研究虽发现 bone - DLBCL 患者生存结局相对较好，但其免疫分子特征和生存优势的内在机制却如同迷雾，亟待揭开。

同时，随着靶向和免疫调节疗法的兴起，精准治疗成为肿瘤治疗的新方向。然而，由于对不同解剖部位 DLBCL 的分子特征和肿瘤微环境（TME）了解不足，难以根据患者的具体情况制定个性化的治疗方案。这就好比在黑暗中摸索，医生缺乏精准的导航，无法为患者提供最有效的治疗。

为了驱散这团迷雾，来自莱顿大学医学中心（Leiden University Medical Center）等多个研究机构的研究人员展开了深入研究。他们的研究成果发表在《Blood Cancer Journal》上，为我们理解 bone - DLBCL 带来了新的曙光。

研究人员开展的是一项回顾性研究。他们精心挑选了 72 例成人 bone - DLBCL 患者，其中包括 20 例 polyostotic - DLBCL 和 52 例 PB - DLBCL 患者，并纳入 34 例具有生发中心 B 细胞（GCB）表型的结内 DLBCL（nodal - DLBCL - GCB）患者作为对照。在研究过程中，研究人员主要运用了以下几种关键技术方法：

• 肿瘤基因组分析：利用定制的 BLYMFv2 靶向新一代测序（tNGS）面板，对 128 个淋巴瘤相关基因进行检测，分析基因突变情况。部分样本因测序失败，使用 LYMFv1 面板进行分析。
• 基因表达谱分析：采用定制的 BLYM - 777 基因表达谱（GEP）面板，基于 nanoString nCounter 平台，对淋巴瘤发生和 TME 相关基因进行检测，分析基因表达特征。
• TME 表型分析：通过特定基因集对 TME 进行聚类分析，确定 TME 的免疫特征。运用 CIBERSORTx 等工具，对 TME 中的细胞成分进行评估。

患者队列特征

研究人员首先对患者队列进行了详细分析。结果发现，polyostotic - DLBCL、PB - DLBCL 和 nodal - DLBCL - GCB 患者的中位年龄分别为 60 岁、60.0 岁和 64 岁 ，差异无统计学意义。按照 Ann Arbor 分期系统，所有 polyostotic - DLBCL 患者均为 IV 期，IPI 评分显著较高。在治疗方面，大多数患者接受 R - CHOP（类似）化疗免疫疗法，不同亚型在治疗周期和是否接受放疗上存在差异，但均无统计学意义。在生存结局上，polyostotic - DLBCL、PB - DLBCL 和 I/II 期 nodal - DLBCL - GCB 患者之间未观察到差异。此外，通过 Hans 算法和 Lymph2Cx 分类，多数 bone - DLBCL 和 nodal - DLBCL - GCB 患者被确定为 GCB 表型。

基因组特征

研究人员对基因组特征展开深入研究。发现 PB - DLBCL 和 polyostotic - DLBCL 具有相似的突变谱，频繁发生 BCL₆、EZH₂、KLHL₆和 TNFRSF14 突变 ，仅 polyostotic - DLBCL 中 IRF₈突变缺失明显。而 bone - DLBCL 与 nodal - DLBCL - GCB 的突变谱存在显著差异，bone - DLBCL 中 EZH₂突变频繁，nodal - DLBCL - GCB 中 HIST1H1E 和 MYC 突变或易位更为常见。通过 LymphGen 等多种基因分型算法分析，不同亚型在基因分型上也呈现出各自的特点。同时，研究人员还发现 TNFRSF14 突变在年轻患者中更为常见，B₂M 突变与较差的生存结局相关，KLHL₆突变则与较好的生存结局相关 。

基因表达谱特征

在基因表达谱特征研究中，GEP 数据显示 PB - DLBCL 和 polyostotic - DLBCL 无显著差异，进一步支持将它们合并为统一的 bone - DLBCL 实体进行分析。与 nodal - DLBCL - GCB 相比，bone - DLBCL 有 30 个显著差异表达基因 。基因集富集分析（GSEA）表明，bone - DLBCL 在与细胞外基质和骨相关的通路中显著富集，而 nodal - DLBCL - GCB 在细胞周期相关通路中富集。通过无监督聚类分析，bone - DLBCL 主要被分类为 “中等 / 丰富” 的 TME 类别，而 nodal - DLBCL - GCB 则更多与 “丰富 / 耗竭” 的特征相关。这意味着 bone - DLBCL 具有相对更丰富的免疫微环境。

免疫富集与生存关联

研究人员进行无监督聚类分析，发现基于 GEP 数据可将样本分为两个不同的簇。其中一个簇中 75% 的样本为 bone - DLBCL，该簇被命名为 “免疫丰富” 簇，具有更好的生存结局 ，包括总生存期（OS）、无进展生存期（PFS）和疾病特异性生存期（DSS）均显著改善。多变量分析表明，免疫聚类是独立的预后因素。与之相对的另一个簇则被称为 “免疫低” 簇，主要由 nodal - DLBCL - GCB 组成。进一步分析发现，免疫丰富簇中调节性 T 细胞、免疫抑制 / 促淋巴瘤细胞因子和血管内皮细胞的功能基因表达特征（FGES）评分更高，同时该簇中调节性 T 细胞和活化肥大细胞的丰度也更高。这表明免疫丰富的 TME 与更好的生存结局密切相关。

免疫蛋白表达验证

研究人员通过 CD₃和 FOXP₃免疫组化对部分病例进行评估。结果发现，CD₃和 FOXP₃的 “高”“低” 表达组之间存在显著重叠 。CD₃蛋白表达与 CD₃D、CD₃E 和 CD₃G 的平均基因表达水平显著相关，FOXP₃评分也与平均 CD₃表达相关。此外，“高” 蛋白 T 细胞浸润与 T 细胞迁移、滤泡辅助性 T 细胞、调节性 T 细胞和肿瘤浸润淋巴细胞的 FGES 评分升高相关。这从蛋白质水平进一步证实了 “免疫高 / 低”TME 分类的准确性。

综合上述研究，研究人员得出结论：PB - DLBCL 和 polyostotic - DLBCL 具有相似的突变和基因表达谱，支持将它们归类为统一的 bone - DLBCL 实体。bone - DLBCL 与免疫丰富的 TME 相关，其中调节性 T 细胞等特定 T 细胞亚群丰富，且与卓越的生存结局相关。这一发现意义重大，为 bone - DLBCL 的治疗开辟了新的方向。它提示医生可以根据患者的免疫分子亚型制定更精准的治疗策略，对于免疫丰富型的患者，或许可以尝试降低免疫化疗的强度，同时探索新兴免疫调节疗法，如免疫调节药物（IMIDs）、双特异性抗体或嵌合抗原受体（CAR）T 细胞疗法的应用潜力 ，有望在提高治疗效果的同时，减少化疗的毒副作用，改善患者的生存质量和生存结局。不过，该研究也存在一定的局限性，如回顾性研究的固有缺陷、靶向基因 panel 的局限性以及样本量的限制等。未来还需要更多大规模、前瞻性的研究来进一步验证和完善这些发现，为 bone - DLBCL 患者带来更多的希望。