日本冷冻玉米中分离的单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）和无害李斯特菌（Listeria innocua）基因组测序：洞察潜在健康风险

为探究冷冻农产品中李斯特菌属（Listeria spp.）的流行情况和基因组信息，研究人员从日本零售冷冻玉米中分离出 6 株李斯特菌属菌株进行测序。结果显示，这些菌株基因组大小在 2,853,850 - 3,062,263 bp 之间，还鉴定出了毒力相关基因，为研究提供数据。

　　李斯特菌属（Listeria）是一类革兰氏阳性短杆菌，能在冷藏温度下生长，包含 28 个物种。其中，单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）是食源性病原体，可引发李斯特菌病，导致脑膜炎和流产，常从即食食品中分离出来。而无害李斯特菌（Listeria innocua）等其他物种，因广泛存在于自然环境，被作为食品设施中食品的指示菌进行研究。有报道称冷冻蔬菜可能引发李斯特菌病爆发，但冷冻农产品中李斯特菌属的流行情况和基因组信息有限。

研究人员从日本零售冷冻玉米中分离出李斯特菌属菌株。具体操作是，将每份 25g 的冷冻玉米样本与 225mL 半 Fraser 肉汤（Neogen）混合均质，在 37°C 富集培养 24h，然后使用 3M 分子检测试剂盒 2 - 单核细胞增生李斯特菌（Neogen）鉴定单核细胞增生李斯特菌阳性培养物。阳性培养物涂布在 CHROMagar 李斯特菌培养基（Chromagar）上，37°C 孵育 48h 后分离典型菌落。

得到 6 株来自不同玉米样本的李斯特菌属菌株（20V - 2 - 1、20V - 2 - 6、20V - 6 - 1、20V - 6 - 4、20V - 6 - 5 和 20V - 7 - 1）。这些菌株在脑心浸液琼脂上 37°C 培养 18h 后，用 Maxwell RSC 血液 DNA 提取试剂盒（Promega）从单个菌落提取基因组 DNA。取 1μg DNA，用 NEBNext 快速 DNA 片段化和建库试剂盒（New England Biolabs）制备 DNA 文库（片段大小约 200 - 300bp），并使用 Ion Chef/GeneStudio S5 系统（Life Technologies）进行分析。原始读数通过 CLC 基因组工作台 24.0 版本（Qiagen）进行质量修剪和从头组装，得到的重叠群用 DDBJ 快速注释和提交工具（DFAST）1.6.0 版本进行注释，所有分析均使用软件默认参数。

6 株菌株的原始读数数量在 4,967,663 - 7,658,227 之间，组装成 42 - 89 个重叠群，基因组大小为 2,853,850 - 3,062,263bp，覆盖度 381× - 564×。基因组 GC 含量为 37.3% - 37.9%，编码序列有 2,846 - 3,056 个。经 Institut Pasteur 多位点序列分型（MLST）网站分析，20V - 2 - 1 菌株为属于 CC1008/ST1008 的无害李斯特菌，其余 5 株为属于谱系 II 型且序列类型各异的单核细胞增生李斯特菌。利用 VirulenceFinder 2.0 进行计算机分析，在无害李斯特菌分离株中鉴定出 30 个与毒力因子相关的基因，在单核细胞增生李斯特菌分离株中鉴定出 87 - 90 个毒力相关基因。

这些结果为从冷冻玉米中分离的单核细胞增生李斯特菌和无害李斯特菌菌株提供了基因组序列数据，表明这些菌株可能对人类健康构成潜在风险。此外，还需要更多数据来深入了解食品中的李斯特菌属。