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头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）恶性程度高，预后差。研究人员探究 HNSCC 衍生的细胞外囊泡（EVs）对血小板的作用。结果发现 EVs 通过组织因子（TF）介导 Ca2?依赖的血小板激活和聚集，这为治疗 HNSCC 血栓并发症提供潜在靶点。
在癌症的世界里，头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）就像一个凶猛的 “怪兽”，它恶性程度高，患者的临床结局往往很差，高复发率和转移率让治疗困难重重。肿瘤细胞的高度异质性以及肿瘤微环境（TME）的免疫抑制作用，更是为它的 “恶行” 推波助澜。在肿瘤微环境的众多 “帮凶” 中，肿瘤细胞分泌的细胞外囊泡（EVs）逐渐进入人们的视野。EVs 就像是细胞间的 “信息快递员”，能在细胞之间传递遗传物质和生物活性分子，影响肿瘤的发展进程。然而，HNSCC 衍生的 EVs 是如何诱导血小板激活和聚集，进而促进肿瘤相关血栓形成的，这个问题一直困扰着科研人员。为了解开这个谜团，来自德国慕尼黑工业大学（Technical University of Munich）等机构的研究人员展开了深入研究。他们的研究成果发表在《Cell Communication and Signaling》上，为 HNSCC 的治疗带来了新的曙光。
研究人员为了深入探究 HNSCC 衍生的 EVs 对血小板的影响机制，运用了多种关键技术方法。他们从 HNSCC 细胞系（SAS、UD - SCC 5）中提取 EVs，采用大小排阻色谱（SEC）法进行分离，并通过纳米颗粒跟踪分析（NTA）、透射电子显微镜（TEM）成像、流式细胞术和蛋白质免疫印迹（Western blotting）等技术对 EVs 进行全面表征 。同时，利用血小板聚集实验、血小板活性检测、蛋白质组学分析等方法，研究 EVs 诱导血小板激活和聚集的机制。
研究结果如下：
- HNSCC 衍生 EVs 的理化特性：通过 SEC 法成功从 HNSCC 细胞系中分离出 EVs，NTA 分析显示其直径在 50 - 300nm 之间，TEM 图像证实了其球形结构和相应大小范围。流式细胞术和 Western blotting 分析表明，这些 EVs 表达典型的外泌体标记物，如 CD9、CD63、CD81 和肿瘤易感基因 101（TSG101），且不表达非外泌体的内质网蛋白葡萄糖调节蛋白 94（GRP94）。
- Ca2?依赖的血小板激活和聚集：HNSCC 衍生的 EVs 能以浓度依赖的方式诱导血小板聚集，在 2.5 - 5μg/mL 的低浓度下就能触发聚集，60μg/mL 时达到较高聚集水平。该聚集作用依赖 Ca2?，在无 Ca2?的情况下，EVs 无法诱导血小板聚集，而经典激动剂凝血酶受体激活肽 6（TRAP）则不受影响。与 TRAP 相比，EVs 诱导的血小板聚集有明显延迟，且多次洗涤血小板会消除这种聚集，说明可能涉及残留凝血因子。此外，EVs 还能诱导血小板表面激活标记物 CD62P 和 CD63 表达增加，促进 α 颗粒（通过趋化因子配体 5（CCL5）检测）和致密颗粒（通过三磷酸腺苷（ATP）检测）释放，进一步证实了血小板的激活。
- EV 毒性和摄取时间进程：研究发现，60μg/mL 的 EVs 对血小板的毒性较低。通过流式细胞术和共聚焦显微镜分析发现，血小板对 EVs 的摄取在 5min 时极少，2 - 4h 后逐渐增加，表明两者的相互作用随时间推移而增强。
- EV 诱导血小板聚集的机制：一系列抑制剂实验表明，磷脂酶 C（PLC）在 EV 介导的血小板聚集途径中起下游作用，而 EV 诱导的聚集不依赖于 FcγRIIa - IgG 轴。凝血酶受体 1（PAR1）和 PAR4 在 EV 诱导的聚集中起重要作用，抑制凝血酶或其受体能显著减少 EV 诱导的血小板聚集，且 EV 刺激后血小板上清液中的凝血酶活性迅速增加，进一步证实了凝血酶在该过程中的关键作用。
- 组织因子（TF）介导血小板聚集：蛋白质组学分析发现，凝血相关通路在 SAS 衍生的 EVs 中显著富集，TF（CD142）是其中关键蛋白。通过流式细胞术和 Western blotting 证实，SAS 和 UD5 细胞及其 EVs 均表达 TF，而 Raji 细胞及其 EVs 不表达 TF，且 Raji 细胞来源的 EVs 不能诱导血小板聚集。用抗 TF 抗体阻断 TF 后，SAS 和 UD5 细胞来源的 EVs 诱导的血小板聚集明显受到抑制，通过成像流式细胞术还观察到血小板能摄取或结合 EV 相关的 TF。
研究结论和讨论部分指出，HNSCC 衍生的 EVs 通过表面的 TF 启动凝血级联反应，生成凝血酶，进而导致 Ca2?依赖的血小板激活、聚集和颗粒释放，促进了促血栓形成环境的建立。这一发现揭示了 HNSCC 相关血栓形成的新机制，为靶向 EV 介导的通路治疗 HNSCC 患者的血栓并发症提供了潜在的治疗策略。不过，该研究也存在一定局限性，如仅在体外模型中进行研究，未能完全模拟体内肿瘤微环境；实验中使用的 EVs 浓度可能与患者体内的生理浓度存在差异；未对患者来源的 HNSCC 细胞或原发性肿瘤的 EVs 进行研究等。未来需要进一步开展体内研究，使用患者来源的 EVs，以更好地验证研究结果，并明确其临床意义。但无论如何，这项研究为 HNSCC 的治疗开辟了新的方向，有望为患者带来新的希望。
