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非小细胞肺癌（NSCLC）治疗面临挑战，研究人员探究大麻二酚（CBD）与依托泊苷联合治疗 NSCLC 的效果。结果显示，二者联用可促进癌细胞凋亡，抑制癌基因。该研究为 NSCLC 治疗提供新思路。
肺癌，这个 “癌症杀手”，严重威胁着人类的健康。在肺癌的众多类型中，非小细胞肺癌（NSCLC）占比高达 85%。它就像一个狡猾的敌人，不仅生长方式异于其他肺癌类型，具有明显的异质性，而且在治疗上极为棘手。目前的标准化疗方案，如使用顺铂、卡铂和紫杉醇等药物，虽然在一定程度上能够对抗癌症，但却存在诸多弊端。一方面，这些药物的治疗有效率较低，很多患者无法从中获得理想的治疗效果；另一方面，随着治疗的进行，癌细胞容易产生耐药性，使得治疗效果大打折扣，同时，这些药物还会带来严重的不良反应，给患者的身体带来沉重负担。而依托泊苷，虽然在治疗小细胞肺癌（SCLC）等恶性肿瘤方面有一定效果，可在 NSCLC 的治疗上却成效不佳。
在这样的困境下，大麻二酚（CBD）进入了研究人员的视野。CBD 是从大麻中提取的一种化合物，在治疗儿童严重癫痫方面表现出色，已经有相关药物获批上市。但它在 NSCLC 治疗领域的潜力，却一直未被充分挖掘。那么，CBD 能否成为攻克 NSCLC 的新武器呢？韩国科学技术研究院（Korea Institute of Science and Technology）等机构的研究人员展开了深入研究。他们致力于探究 CBD 与依托泊苷联合使用时，能否增强对 NSCLC 的治疗效果，为患者带来新的希望。
研究人员为开展此项研究，运用了多种关键技术方法。细胞实验方面，采用细胞活力检测（如 WST-8 assay）评估不同处理对 NSCLC 细胞系（A549、NCI-H1703 等）活力的影响；运用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测蛋白表达和磷酸化水平；通过多磷酸激酶分析（Multiphospho-kinase assay）筛选相关信号通路。分子生物学技术上，利用 RNA 测序（RNA-seq）进行转录组分析，还开展了免疫荧光实验。动物实验则建立 A549 细胞的裸鼠异种移植模型，观察药物对肿瘤生长的影响。
低浓度 CBD 对 A549 细胞无明显细胞毒性
研究人员首先对 CBD 的浓度进行筛选。以往研究表明，高剂量（超过 40μM）的 CBD 具有抗癌活性，但会影响细胞凋亡。在本次研究中，实验发现浓度高于 25μM 的 CBD 会对 A549 细胞产生明显的细胞毒性，并改变相关凋亡蛋白标记物的表达模式。因此，研究人员选择 15μM 的 CBD 用于后续实验，这个浓度对 A549 细胞无明显细胞毒性。
CBD 增强 A549 细胞对依托泊苷的敏感性
研究人员将 CBD 与多种抗癌药物（依托泊苷、顺铂、紫杉醇和他莫昔芬等）联合处理 A549 细胞。结果显示，在这些组合中，依托泊苷与 CBD 联合使用时，对细胞增殖的抑制作用最强。通过检测细胞活力和凋亡相关蛋白标记物，发现联合处理组的凋亡细胞数量明显高于单独使用 CBD 或依托泊苷的处理组。在 A549 细胞的裸鼠异种移植模型实验中，联合治疗也显著减小了肿瘤体积，这表明 CBD 能够增强 A549 细胞对依托泊苷诱导凋亡的敏感性。
联合处理后 A549 细胞的转录组分析
研究人员对联合处理后的 A549 细胞进行 RNA-seq 分析。通过无监督聚类分析和主成分分析，发现联合处理组（依托泊苷 + CBD）与其他组在基因表达上存在明显差异。进一步分析差异表达基因，发现 “上调基因” 与自噬、凋亡和溶酶体信号通路相关，“下调基因” 与细胞周期和 Hippo 信号通路相关。同时，联合处理组中与 NSCLC 发病机制密切相关的癌基因（如 KRAS、NRAS 等）表达显著降低。
CBD 和依托泊苷联合处理诱导自噬性细胞死亡
RNA-seq 分析表明，联合处理组中自噬和溶酶体相关基因显著上调。形态学分析、免疫荧光实验以及 Western blot 分析结果均显示，联合处理促进了细胞的自噬和凋亡。多磷酸激酶分析发现，联合处理使磷酸化的丝氨酸 - 苏氨酸激酶蛋白（AKT）水平显著降低，进而影响 PI3K - AKT - mTOR 信号通路，诱导自噬性细胞死亡。
联合处理诱导的自噬性细胞死亡与 LATS1-p53-PTEN 轴相关
研究人员深入分析 PI3K - AKT - mTOR 相关基因的表达，发现联合处理组中 PTEN、GSK3B 和 TSC1 的表达水平显著高于其他组。联合处理还增强了 p53 在 Ser46 位点的磷酸化以及 MDM2 原癌基因在 Ser395 位点的磷酸化，激活 p53 通路，引发细胞凋亡。通过对不同 p53 状态的细胞系（p53 突变细胞系 Calu-3、NCI-H1703，p53 缺失细胞系 NCI-H358、NCI-H1299）进行实验，证实了野生型 p53 对联合治疗效果的重要性，即功能性野生型 TP53 能够增强联合治疗的疗效。
联合处理诱导的自噬性细胞死亡与 CNRs 和 TRPVs 的经典通路无关
研究人员构建 CNR1 和 CNR2 过表达模型，并用针对 TRPV1 和 TRPV2 的 siRNA 处理细胞，发现联合处理对细胞增殖的抑制作用与 CNR1、CNR2 以及 TRPV1、TRPV2 的表达无关，表明联合处理诱导的自噬性细胞死亡不依赖于 CNR 和 TRPV 信号通路。
综合上述研究结果，该研究表明 CBD 与依托泊苷联合使用，能够通过诱导自噬性细胞死亡和抑制癌基因通路，显著促进 NSCLC 细胞的凋亡，且对正常肺成纤维细胞影响较小。这一联合治疗策略的效果与 p53 状态密切相关，功能性野生型 TP53 能够增强其疗效，并且该联合治疗不依赖于传统的大麻素受体（CNRs）和瞬时受体电位阳离子通道（TRPVs）通路，可能通过非经典机制发挥作用。
该研究为 NSCLC 的治疗提供了一种全新的策略，具有重要的临床意义。它不仅为那些对现有治疗方案耐药或不适用的患者带来了新的希望，尤其是携带 p53 突变的患者，而且拓宽了 CBD 在抗癌领域的应用范围，为后续的临床前和临床研究奠定了坚实的基础。同时，该研究也为药物再利用提供了成功案例，提示传统用于治疗 SCLC 的依托泊苷，在与 CBD 联合使用时，有望在 NSCLC 治疗中发挥更大的价值。
