综述：优化免疫细胞治疗生产中的病毒转导：关键工艺设计考量

这篇综述系统分析了免疫细胞治疗（CAR-T/NK等）生产中病毒转导（LV/yRV/AV/AAV）的关键工艺参数（CPPs）与质量属性（CQAs），提出了提升转导效率、安全性和可扩展性的策略，涵盖细胞类型（T/NK/DC）、载体设计（VSV-G伪型/EF1α启动子）、工艺优化（MOI/离心增强/32℃培养）等核心环节，为下一代细胞疗法开发提供标准化参考。

　　

病毒转导在免疫细胞治疗制造中的基础

免疫细胞疗法通过体外改造（ex vivo）T细胞、NK细胞等实现疾病治疗。病毒载体系统选择尤为关键：慢病毒（LV）凭借稳定整合特性成为CAR-T主流载体，而γ-逆转录病毒（yRV）需细胞处于增殖期才能转导。腺病毒（AV）和腺相关病毒（AAV）则因瞬时表达特性适用于疫苗开发。

关键质量属性（CQAs）的控制

转导效率（30-70%为临床理想范围）直接决定疗效，需通过流式细胞术和ddPCR检测。载体拷贝数（VCN）需<5 copies/cell以避免基因毒性，而细胞活力与功能（如IFN-γ分泌能力）反映产品活性。记忆T细胞亚群（T_SCM）比例与体内持久性正相关，可通过IL-7/IL-15细胞因子组合维持。

工艺参数（CPPs）的精准调控

细胞预处理：IL-12预刺激提升T细胞转导效率20%，血清替代物Physiologix效果优于人血清。
载体设计：VSV-G伪型载体依赖LDL-R受体，而H/F伪型靶向SLAM受体实现静息T细胞转导。EF1α启动子驱动强表达但易致T细胞耗竭，MSCV启动子更平衡。
转导条件：MOI=10时CD8⁺ T细胞效率达80%，32℃培养可保留T_N（CD62L⁺CD45RO^-）表型。离心增强（spinoculation）使效率提升至83.4%，RetroNectin较传统polybrene降低细胞毒性49%→5%。

挑战与创新

NK细胞转导效率（10-77%）受限于先天抗病毒机制，CD48靶向载体和IL-15预处理可突破瓶颈。CRISPR介导的PD-1敲除能延缓T细胞耗竭，而自动化系统（如CliniMACS Prodigy）实现封闭式生产，批次差异<5%。未来，人工智能驱动的工艺优化和体内转导技术或将重塑产业格局。

（注：全文严格依据原文数据，未添加非文献支持结论）